[发明专利]用于检测至少一个第一抑制区存在或不存在的方法

说明书

用于检测至少一个抑制区的存在或不存在的方法，所述方法包括由下述组成的步骤：沿着设置区设置一定体积的液体形式的样品，所述设置区沿着在琼脂培养基的表面处的轴线延伸，和由下述组成的步骤：将确定量的化学试剂设置在琼脂培养基的表面处，所述设置限定了潜在的抑制区，所述样品的设置区的轴线与潜在的抑制区相交。

技术领域

本发明的技术领域是微生物学的技术领域。更具体而言，本发明涉及在化学试剂存在下，检测含有或易于含有微生物的样品的至少一个第一抑制区的存在或不存在。

更具体而言，本发明涉及用于测定微生物对抗生素的敏感性的测试。

背景技术

常规灵敏度测试是盘扩散测试，通常称为Kirby-Bauer方法。该标准化方法涉及用从微生物分离物获得的一般标准化为0.5McFarland的样品接种琼脂培养基(例如90mm或150mm Mueller-Hinton琼脂)。接种可以通过常规手动方法，借助于拭子或环进行。可替代地，接种可以通过将琼脂用标准化至0.5McFarland的十分之一的悬浮液浸没来进行，随后去除过量的样品。在接种之后，在琼脂的表面上设置浸渍有确定浓度的抗生素的一个或多个纸盘。在温育期之后，一般为在35℃下16至20小时，盘周围的抑制区的直径使得能够测定接种样品中存在的微生物对每个盘中浸渍的每种抗微生物剂的敏感性。由于Kirby-Bauer方法的标准化，通过比较每个抑制区的直径与由监管机构如NCCLS(美国国家临床实验室标准委员会(National Committee for Clinical Laboratory Standards))或EUCAST(欧洲抗微生物药物敏感测试委员会(European Committee on Antimicrobial SusceptibilityTesting))公布的推荐值，来分析这种方法的结果。结果因此通常根据下述三个陈述之一进行分类：敏感、中等或抗性。这些推荐值因此反映在与每种抗生素相关的每种微生物的抑制区大小的相关参考敏感性阈值中。

“敏感”意指在抗生素的存在下，由于一定浓度的抗生素，样品中存在的微生物的生长或甚至存活是不可能的。“中等”意指在抗生素的存在下，由于一定浓度的抗生素，微生物的生长受到损害。“抗性”意指在抗生素的存在下，微生物的生长是可能的，至少直到抗生素对于待治疗患者毒性的阈值。

用于检测对抗生素的敏感性的另一种方法使用设置在琼脂培养基上的抗生素梯度。为此，用抗生素的浓度梯度浸渍纸或塑料测试条。以这种方式浸泡的测试条是有刻度的，以便指示沿着测试条存在的抗生素浓度值。可以将一个或多个测试条放置在Mueller-Hinton琼脂上，所述Mueller-Hinton琼脂预先以与上述方法相同的方式接种。在温育后，如果样品中存在的微生物对测试条中含有的抗生素敏感，则出现在每个测试条周围的微生物生长的卵圆形抑制区。因此能够推断关于微生物生长的最小抑制浓度(MIC)。使得能够抑制一般保留的微生物生长的抗微生物剂的最小浓度因此是可以直接在抑制区与测试条的长边缘之间的接触点下方的刻度上读取的浓度值。换言之，MIC是在微生物生长区和非生长区之间的边界处，在抑制区的极限处可见的浓度。更具体而言，可以通过记录在其下抑制区的卵形区域与测试条相交的点，并且通过记录相应的刻度来读取MIC。

这些方法的缺点是它们难以自动化。特别地，通过浸没的接种步骤需要通过操作者对盘的环形运动和旋转，以便将样品设置物正确地分布在琼脂的整个表面上。这种特殊的运动需要进行其的操作者的一定技术能力，并且特别难以用机器再现。因此，为了以自动化方式进行，该方法需要用于目视检查沉积物的工具，以确保琼脂的整个表面被样品覆盖。可以使用的不同类型的液体样品之间，尤其是在直接获得自血培养物和再悬浮样品的样品之间的粘度变化，也使设置的自动化变得复杂。此外，用于去除过量样品的操作也需要用于精确检测和移液琼脂表面的工具。最后，这种方法需要毫升量级的大量样品，这增加了与通过操作者处理这些样品相关的生物学风险。

用拭子或环设置的自动化也是漫长和繁琐的，尤其是为了覆盖培养基的整个表面。