[发明专利]细胞测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种细胞量的测定方法。

背景技术

在针对上皮性恶性肿瘤(epithelial malignant tumor)或肉瘤(sarcoma)等的抗癌剂的感受性试验中，通过将与抗癌剂接触的癌细胞和不与抗癌剂接触的癌细胞在相同条件下进行培养，将培养后的癌细胞的增殖度进行比较，来评价癌细胞对抗癌剂的感受性。癌细胞的增殖越少则越为优异的抗癌剂。

作为癌细胞的培养法，专利文献1～专利文献5中记载有将癌细胞包埋于胶原凝胶中来培养的方法。已知所述胶原凝胶包埋培养法与在琼脂等的表面培养癌细胞的表面培养法相比，癌细胞的增殖良好地进行。

作为所培养的癌细胞的定量方法，专利文献1中记载有如下方法：利用TV照相机等来拍摄增殖的癌细胞，对所获得的图像信息进行电子性图像分析，算出癌细胞菌落的推定体积值。另外，专利文献3中记载有如下方法：将在胶原凝胶内培养的癌细胞以色素染色来拍摄，基于图像浓度来定量癌细胞。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本专利特开平3-285696号公报

专利文献2：国际公开第95/18216号

专利文献3：日本专利特开平10-115612号公报

专利文献4：日本专利第3363445号公报

专利文献5：日本专利特开2008-11797号公报

发明内容

发明所要解决的问题

专利文献1或专利文献3中记载的癌细胞的定量方法中，存在定量精度的进一步提高的课题。抗癌剂的感受性试验以前是以从癌患者体内摘除的外科手术材料作为起始材料来进行。近年来，出于减轻患者的身体负担的目的，对于以使用穿刺针等来采集细胞的生检材料作为起始材料的抗癌剂感受性试验的迫切期望提高。但是，生检材料中，与手术材料相比，可采集的组织片小，在抗癌剂感受性试验中，要求精度良好地定量现有的十分之一以下的细胞量。专利文献1或专利文献3中，难以精度良好地定量如此少量的癌细胞。

本发明是考虑到以上所述而形成，目的在于提供一种定量精度更高的细胞测定方法。

解决问题的技术手段

本发明的细胞测定方法包括：将所培养的靶细胞以色素染色的步骤；获取第1图像及第2图像的步骤，所述第1图像及第2图像为相对于所述色素的吸光度不同的第1光及第2光的透射图像；将所述第1图像及所述第2图像分别分割为多个分割区域，在每个所述分割区域中将所述第1图像与所述第2图像进行比较而排除噪声的步骤；以及通过在排除了所述噪声的图像中对每个所述分割区域的细胞量的指标进行累计来评价所述靶细胞量的步骤。

此处，所谓靶细胞是指所要测定的细胞。另外，所谓噪声是指并非由经染色的靶细胞而来的不需要的图像信息。另外，所谓细胞量的指标，是指图像的浓淡、或根据图像的浓淡来算出的吸光度等与细胞的多寡对应而增减的指标。通过所述方法，可排除成为误差的原因的噪声的影响，从而精度良好地测定细胞量。

优选的是，排除所述噪声的步骤是在每个所述分割区域中将所述第1图像与所述第2图像进行比较，当所比较的分割区域的明度的差或比小于既定值时，将所述分割区域从成为所述靶细胞量的评价的基础的数据中除外的步骤。

或者优选的是，排除所述噪声的步骤是在每个所述分割区域中将所述第1图像与所述第2图像进行比较，当所比较的分割区域的吸光度的差或比小于既定值时，将所述分割区域从成为所述靶细胞量的评价的基础的数据中除外的步骤。

优选的是所述靶细胞为癌细胞。

优选的是所述靶细胞为经三维培养的细胞，更优选的是所述细胞为包埋于胶原凝胶中来培养的细胞。

优选的是，所述第1图像及所述第2图像是通过对同时照射所述第1光及所述第2光并利用1台彩色照相机进行拍摄而得的图像进行分色而获取。

或者优选的是，所述第1图像及所述第2图像是通过依次照射所述第1光与所述第2光并利用1台彩色照相机随时进行拍摄而获取。

优选的是，所述靶细胞量的评价是通过在每个所述分割区域中根据图像明度来算出吸光度，并遍及多个所述分割区域对所获得的吸光度进行累计以算出靶细胞的推定体积值来进行。

发明的效果

根据本发明的细胞测定方法，即便所培养的靶细胞为少量，也可精度良好地评价细胞量。

附图说明

图1是表示本发明的第1实施方式中所使用的细胞测定装置的构成例的图。

图2是本发明的第1实施方式的癌细胞定量方法的流程图。