[发明专利]用于酶置换疗法的改造酶

权利要求书

1.一种改造酶，包含与一人类β-葡萄糖醛酸苷酶的氨基酸序列至少80％相同的一氨基酸序列，其中与所述人类β-葡萄糖醛酸苷酶相较，所述改造酶显现出一较高量的α-己醛糖酸盐水解酶酶活性。

2.如权利要求1所述的改造酶，其中所述人类β-葡萄糖醛酸苷酶包含如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。

3.如权利要求2所述的改造酶，其中所述改造酶在所述如SEQ ID NO:2所示的序列中对应于残基T204、Q279、K438、N484、N502、S503、Y504、S506、Y508、H509、G542、T545、L565、W587、F592、T594、E595、P598、R600、G603、N604、K606，及/或P636的一残基处包含一取代。

4.如权利要求3所述的改造酶，其中所述改造酶在N484、N502、S503、S506、H509、F592、E595、N604，及/或K606处包含一取代。

5.如权利要求3所述的改造酶，其中残基204为T或K；残基279为Q或H；残基438为K或M；残基484为S、D、H、R、S或C；残基502为N、D或K；残基503为A、D、Y、P、H或V；残基504为Y、G或C；残基506为S或G；残基508为Y或D；残基509为H、A或P；残基542为G或D；残基545为T或A；残基565为L或A；残基587为W或T；残基592为F或Y；残基594为T或L；残基595为L、V、Q或G；残基598为P或D；残基600为R或A；残基603为G或E；残基604为Y、S、A或T；残基606为Q、F或L；且残基636为P或S。

6.如权利要求1-5任一项所述的改造酶，其中所述改造酶在所述如SEQ ID NO:2所示的序列中对应于残基S447、G542、L565、W587、R600、G603，及/或P636的残基处不包含一取代。

7.如权利要求3所述的改造酶，其中所述改造酶包含残基S484、D502、A503、G506、A509、D542、A545、Y592、V595、S604，及/或F606。

8.如权利要求3所述的改造酶，其中所述改造酶包含残基H279、C484、K502、Y503、G504、G506、P509、A545、A565、L594、Q595、A604，及/或F606。

9.如权利要求3所述的改造酶，其中所述改造酶包含残基D484、K502、Y503、G506、D508、P509、A545、Y592、L594、G595、D598、T604、F606，及/或S636。

10.一种核酸分子，其包含编码如权利要求1-9任一项所述的改造酶的核酸序列。

11.一种宿主细胞，其包含如权利要求10所述的核酸分子。

12.一种医药组合物，包含如权利要求1-9任一项所述的改造酶以及一医药上可接受的载体。

13.一种在受试者中治疗黏多糖贮积症的方法，包含对一有需要的受试者施用如权利要求1-9任一项所述的改造酶。

14.一种发展候选酶置换疗法的方法，所述候选酶置换疗法用于在具有与缺陷酶相关的疾病的受试者中治疗该疾病，该方法包含：

选择一模板酶，其中所述模板酶对该受试者而言是内源性的，且在该受试者体内正常地表达；以及

改变所述模板酶以获得一改造酶，其中与所述模板酶的目标酶活性相较，所述改造酶显现出增加目标酶活性，所述目标酶活性是所述缺陷酶的野生型对应物的酶活性；

其中所述改造酶为用于治疗该疾病的候选酶置换疗法。

15.一种鉴定候选酶置换疗法的方法，所述候选酶置换疗法用于在具有与缺陷酶相关的疾病的受试者中治疗该疾病，该方法包含：

提供改造酶的库，其中在所述库中的每种改造酶为一模板酶的变体，所述模板酶对该受试者而言为内源性的，且在该受试者体内正常地表达；以及

测定所述库的目标酶活性，其中所述目标酶活性为所述缺陷酶的野生型对应物的酶活性；

其中，与所述模板酶的目标酶活性相较，显现出一增加目标酶活性的一改造酶为用于治疗该疾病的候选酶置换疗法。