[发明专利]免疫测定方法、免疫层析试剂盒在审

专利信息
申请号: 201680041878.7 申请日: 2016-07-15
公开(公告)号: CN107850593A 公开(公告)日: 2018-03-27
发明(设计)人: 加藤佑弥;岩本久彦 申请(专利权)人: 田中贵金属工业株式会社
主分类号: G01N33/543 分类号: G01N33/543;C12Q1/04;G01N33/53;G01N33/569;C12M1/34
代理公司: 北京天昊联合知识产权代理有限公司11112 代理人: 张苏娜,常海涛
地址: 日本*** 国省代码: 暂无信息
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摘要:
搜索关键词: 免疫测定 方法 免疫 层析 试剂盒
【说明书】:

技术领域

本发明涉及免疫层析试剂盒、该试剂盒所使用的试剂组合物或检体处理液及检测方法,其中所述免疫层析试剂盒作为用于检测试样液中的被检测物(抗原等)(例如革兰氏阳性菌,特别是溶血性链球菌)、进一步同时检测革兰氏阳性菌(特别是溶血性链球菌)和病毒类(特别是腺病毒)这两者的便利的体外诊断试剂盒或便携用诊断装置,其重要性高。特别涉及通过使用特定的试剂组合物来制备溶链菌检查中多糖体的提取所需的亚硝酸,从而无需每次用时制备即可使亚硝酸在检查设备上简便地生成以提高检查效率及检查精度的检查方法。

背景技术

近年来,在免疫层析用条带形式的免疫测定中,作为利用抗体具有的特异的反应性来检测试样液中的被检测物(抗原等)的简便的体外诊断试剂盒或便携用诊断装置,通用性日益提高。

特别是最近关于基于免疫层析法的简便的检测工具(其用于检查有无感染流感病毒或细菌这样的病原体)也受到关注,已经进行了研究开发。

溶血性链球菌(以下也称为“溶链菌”。)的诊断通过以群特异性的多糖体为抗原进行检查来进行。作为多糖体的提取法,已知有使用了酶或噬菌体、盐酸或次氯酸等的方法,但使用亚硝酸的提取法最常见。

利用亚硝酸的提取法具有糖多糖体的高提取效率和亚硝酸便宜且容易操作这样的优点,但亚硝酸自身为不稳定而易分解的化合物,因此,具有必须每次在提取前将亚硝酸钠和醋酸等有机酸混合,以制备亚硝酸这样的缺点。

另外,在不断地进行诊断的情况下,每次都制备亚硝酸成为医师及检测技师的较大的负担。此外,由于包括混合工序,因而也存在由于试剂的错误混合等所引起的不能进行正确安全的诊断的可能性、由于提取时间的差异所引起的测定再现性降低的问题等。

为了克服该问题点,关于用于简化从溶血性链球菌中提取多糖抗原的工序的简便的检查工具也已经进行研究开发。

例如,在专利文献1中,提出了一种从生物(特别是链球菌A组或B组)提取多糖抗原的简化的提取方法,其中,使用将以下物质组合而成的试剂盒:a.渗入测定量的亚硝酸盐并干燥的第一吸收性物质、b.渗入测定量的中和碱及缓冲液并干燥的第二吸收性物质、c.测定量的酸的水溶液(参照专利文献1)。

另外,在链球菌感染的诊断时,需要首先进行多糖抗原的提取工序,接着使所得到的溶液与免疫测定装置接触并进行抗原的检测工序这样的麻烦的处理工序。因此,包括多糖抗原的提取工序及标记物的测定工序的对试样中的生物简便地进行测定检查的方法以及为此的试剂盒的开发成为课题。

例如,在专利文献2中,公开了一种用于检测链球菌科等的微生物/细菌性生物体中特征性的碳水化合物抗原的分析装置及方法。在该侧向流动分析装置中,提供了一种包括具有以下部分的基材的装置:a.样品接收区、b.提取区(提取试剂;固定化或吸收并干燥的酸及亚硝酸盐)、c.中和剂(中和缓冲剂;TRIS)、d.检测区(捕捉/检测试剂)(参照专利文献2)。

进而,也开发了一种对含有链球菌的多种不同的生物同时进行测定检查的方法以及为此的试剂盒。例如,在专利文献3中,记载了一种对第一生物为革兰氏阳性细菌(例如A、B、F或G组链球菌、肠球菌细菌等)、第二生物为病毒类或革兰氏阴性细菌类等这样的试样中的多种不同的生物种进行测定的方法及试剂盒。

其可利用在一个以上的容器内具备以下物质的试剂盒对多种检体同时进行检测:a.亚硝酸或干燥状态的酸及亚硝酸盐、b.表面活性剂、c.与从第一生物得到的第一标记物结合的第一结合试剂、d.与从第二生物得到的第二标记物结合的第二结合试剂,由此可以实现检查效率的倍增和患者检查所伴随的痛苦的减轻,以及可以适当地组合对多种致病生物有效的治疗剂来进行投药。

在此,作为与亚硝酸盐组合使用的酸,记载有无机酸(盐酸、硫酸等)或有机酸(醋酸、柠檬酸),优选为有机酸,更加优选为醋酸,并且使用了醋酸作为实施例(参照专利文献3)。

由于溶链菌具有多种血清型,因而利用群特异性的多糖体抗原的检查是常见的。作为从菌体中提取多糖体的方法,已知有利用亚硝酸的提取法。由于亚硝酸为不稳定的化合物,因而需要利用亚硝酸盐和有机酸的用时调整。

但是,存在由于亚硝酸盐的调整而使得检查工序增加的问题、此外由于调整时的操作差异或提取时间的差异所引起的测定再现性等的问题。本发明人等通过使免疫层析试剂盒的两种样品垫分别含浸亚硝酸钠及柠檬酸,成功地简化了操作并提高了测定再现性。然而发现,当含浸的柠檬酸的量增加时,会发生非特异性显色,并且提取效率存在问题。

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