[发明专利]在亲和层析中减少宿主细胞蛋白的方法

说明书

本发明一般涉及多肽纯化领域。本发明具体涉及在含有抗体的溶液中减少宿主细胞蛋白如磷脂酶B样2(PLBL2)或簇蛋白(Clusterin)。

背景技术

蛋白质，特别是免疫球蛋白在当今的医疗序列产品中起着重要的作用。对于人类应用，每种治疗蛋白质必须满足不同的标准。为了确保生物制药剂对人体的安全性，在生产过程中积累的副产物必须被特别去除。为了满足监管规范，制造过程后必须进行一个或多个纯化步骤。除此之外，纯度，生产能力和产量在确定合适的纯化过程中起着重要的作用。

不同的方法已被良好建立并广泛用于蛋白质纯化，例如亲和层析(例如蛋白A或蛋白G亲和层析，单链Fv配体亲和层析)，离子交换层析(例如阳离子交换(磺丙基或羧甲基树脂)，阴离子交换(氨基乙基树脂)和混合模式离子交换)，亲硫吸附(例如，用β-巯基乙醇和其它SH配体)，疏水相互作用或芳香族吸附层析(例如，用苯基-琼脂糖，氮杂arenophilic树脂或间氨基苯基硼酸)，金属螯合亲和层析(例如用Ni(II)-和Cu(II)-亲和材料)，大小排阻层析和电泳方法(如凝胶电泳，毛细管电泳)。

为了纯化重组产生的免疫球蛋白，通常使用不同柱层析步骤的组合。在纯化期间，非免疫球蛋白污染物如宿主细胞蛋白和宿主细胞DNA以及内毒素和病毒被耗尽。因此，通常亲和层析步骤如蛋白A亲和层析之后是一个或多个额外的分离步骤。通常，高电导率缓冲液被描述为用于亲和层析法的洗涤步骤。

在US 6,127,526中描述了一种通过蛋白A层析纯化蛋白质的方法，其包括以下步骤：(a)将蛋白质吸附到固定在包含二氧化硅或玻璃的固相上的蛋白A；(b)通过用疏水电解质溶剂洗涤固相来去除结合到固相上的污染物；和(c)从固相中回收蛋白质。

在WO2011/038894中报道了在从蛋白A层析材料中回收免疫球蛋白之前，通过特定洗涤步骤明显消耗宿主细胞蛋白质和DNA的蛋白A层析法。

在WO2013/177118中报道了从样品基质中分离和纯化抗体的组合物和方法。

在WO2013/033517中报道了从病毒中分离目的多肽(如抗体)的方法。

在EP2583973中报道了一种纯化蛋白质的方法，包括一种或多种层析过程，其中在至少一个层析过程(平衡缓冲液，洗涤缓冲液和洗脱缓冲液)中使用的缓冲液中包含氨基酸；或者二肽，寡肽或其多聚氨基酸，由此纯化具有非常少量杂质的高纯度蛋白质(例如聚合物或宿主细胞蛋白质)。

在WO2015/038888中报道了包含纯化的重组多肽的方法和组合物。

发明概述

本文报道了通过用亲和层析步骤纯化抗体来生产具有降低的特异性CHO宿主细胞蛋白质含量的抗体的方法。

更详细地说，已经发现，在从层析材料中回收抗体之前，通过在亲和层析的洗涤步骤中使用包含组氨酸的水溶液的本发明的方法，在包含抗体的溶液中宿主细胞蛋白质的含量可被减少。特别是可以减少磷脂酶(特别是磷脂酶B样2(PLBL2))的含量。

本文报道的一个方面是在蛋白A层析的洗涤步骤中包含组氨酸的水溶液用于降低(特定)宿主细胞蛋白的含量的用途，其中蛋白A层析用于纯化人IgG4或IgG1同种型抗体。

如本文报道的一个方面是用于产生人IgG4或IgG1同种型抗体的方法，其包括以下步骤

a)培养包含编码人IgG4或IgG1同种型抗体的核酸的细胞，

b)从细胞或培养基中回收人IgG4或IgG1同种型抗体，

c)使人IgG4或IgG1同种型抗体与蛋白A层析材料接触，

d)用包含组氨酸的水溶液洗涤蛋白A层析材料，

e)从蛋白A层析材料中回收人IgG4或IgG1同种型抗体，

从而产生人IgG4或IgG1同种型抗体。

本文报道的一个方面是从样品中纯化人IgG4或IgG1同种型抗体的方法，其包括以下步骤：

a)提供包含人IgG4或IgG1同种型抗体的样品，

b)用蛋白A层析法/步骤纯化人IgG4或IgG1同种型抗体，包括用含有组氨酸的水溶液洗涤蛋白A层析材料。

在所有方面的一个实施方案中，所述水溶液包含约50mM至约400mM组氨酸。在所有方面的一个实施方案中，水溶液包含约200mM组氨酸。