[发明专利]降低脱靶效应的CRISPR酶突变

权利要求书

1.一种工程化的CRISPR蛋白，其中：

该蛋白与包含RNA的核酸分子复合，以形成CRISPR复合物，

其中当在该CRISPR复合物中时，该核酸分子靶向一个或多个靶多核苷酸座位

该蛋白与未修饰的蛋白相比包括至少一种修饰，

其中与包含未修饰的蛋白的复合物相比，包含经修饰的蛋白的CRISPR复合物具有改变的活性。

2.如权利要求1所述的工程化的CRISPR蛋白，其中该改变的活性包括就该包含RNA的核酸分子或这些靶多核苷酸座位而言的改变的结合特性、就该包含RNA的核酸分子或这些靶多核苷酸座位而言的改变的结合动力学、或就该包含RNA的核酸分子或这些靶多核苷酸座位而言相比于脱靶多核苷酸座位的改变的结合特异性。

3.如权利要求1或2所述的工程化的CRISPR蛋白，其中该改变的活性包括增加的靶向效率或降低的脱靶结合。

4.如权利要求1至3中任一项所述的工程化的CRISPR蛋白，其中该改变的活性包括修饰的切割活性。

5.如权利要求4所述的工程化的CRISPR蛋白，其中该修饰的切割活性包括就这些靶多核苷酸座位而言的增加的切割活性。

6.如权利要求4所述的工程化的CRISPR蛋白，其中该修饰的切割活性包括就这些靶多核苷酸座位而言的降低的切割活性。

7.如权利要求4至6中任一项所述的工程化的CRISPR蛋白，其中该修饰的切割活性包括就脱靶多核苷酸座位而言的降低的切割活性。

8.如权利要求4至6中任一项所述的工程化的CRISPR蛋白，其中该修饰的切割活性包括就脱靶多核苷酸座位而言的增加的切割活性。

9.如前述权利要求中任一项所述的工程化的CRISPR蛋白，其中该改变的活性包括改变的解旋酶动力学。

10.如前述权利要求中任一项所述的工程化的CRISPR蛋白，其中该经修饰的CRISPR蛋白包含修饰，该修饰改变该蛋白与该包含RNA的核酸分子、或这些靶多核苷酸座位的链、或脱靶多核苷酸座位的链的缔合。

11.如前述权利要求中任一项所述的工程化的CRISPR蛋白，其中该经修饰的CRISPR蛋白包含修饰，该修饰改变该CRISPR复合物的形成。

12.如前述权利要求中任一项所述的工程化的CRISPR蛋白，其中该经修饰的CRISPR蛋白包含修饰，该修饰改变该核酸分子至这些多核苷酸座位的靶向。

13.如权利要求10至12中任一项所述的工程化的CRISPR蛋白，其中该修饰包括该蛋白的与该核酸分子缔合的区域中的突变。

14.如权利要求10至12中任一项所述的工程化的CRISPR蛋白，其中该修饰包括该蛋白的与这些靶多核苷酸座位的链缔合的区域中的突变。

15.如权利要求10至12中任一项所述的工程化的CRISPR蛋白，其中该修饰包括该蛋白的与这些脱靶多核苷酸座位的链缔合的区域中的突变。

16.如权利要求10至15中任一项所述的工程化的CRISPR蛋白，其中该修饰或突变包括该蛋白的与该包含RNA的核酸分子、或这些靶多核苷酸座位的链、或脱靶多核苷酸座位的链缔合的区域中的减少的正电荷。

17.如权利要求10至15中任一项所述的工程化的CRISPR蛋白，其中该修饰或突变包括该蛋白的与该包含RNA的核酸分子、或这些靶多核苷酸座位的链、或脱靶多核苷酸座位的链缔合的区域中的减少的负电荷。