[发明专利]用于制造分支酸衍生物的基因工程化微生物

权利要求书

1.一种能够通过气态底物的发酵制造至少一种分支酸衍生物的基因工程化C1固定梭菌属(Clostridium)细菌，其中所述细菌包含外源性分支酸丙酮酸裂解酶ubiC和以下中的至少一种：

a.外源性异分支酸合成酶pchA，

b.外源性异分支酸丙酮酸裂解酶pchB，或

c.包含破坏性突变的预苯酸合成酶pheA。

2.一种能够通过气态底物的发酵制造至少一种分支酸衍生物的基因工程化C1固定梭菌属细菌，其中所述细菌包含外源性异分支酸合成酶pchA和外源性异分支酸丙酮酸裂解酶pchB；或所述细菌包含外源性异分支酸合成酶pchA和外源性异分支酸丙酮酸裂解酶pchB以及以下中的至少一种：

a.外源性分支酸丙酮酸裂解酶ubiC，或

b.包含破坏性突变的预苯酸合成酶pheA。

3.一种能够通过气态底物的发酵制造至少一种分支酸衍生物的基因工程化C1固定梭菌属细菌，其中所述细菌包含包含破坏性突变的预苯酸合成酶pheA；或所述细菌包含包含破坏性突变的预苯酸合成酶pheA和以下中的至少一种：

a.外源性异分支酸合成酶pchA，或

b.外源性异分支酸丙酮酸裂解酶pchB。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的细菌，其中所述破坏性突变会降低或消除所述预苯酸合成酶的表达或活性，并且其中与亲本细菌相比，所述细菌产生降低量的预苯酸或预苯酸衍生物。

5.根据权利要求1所述的细菌，其中所述细菌包含编码所述外源性分支酸丙酮酸裂解酶ubiC的核酸和至少一种编码以下中的至少一种的核酸：

a.所述外源性异分支酸合成酶pchA，

b.所述外源性异分支酸丙酮酸裂解酶pchB，和

c.包含破坏性突变的所述预苯酸合成酶pheA。

6.根据权利要求2所述的细菌，其中所述细菌包含编码所述外源性异分支酸合成酶pchA的核酸和编码所述外源性异分支酸丙酮酸裂解酶pchB的核酸；或所述细菌包含编码所述外源性异分支酸合成酶pchA的核酸和编码所述外源性异分支酸丙酮酸裂解酶pchB的核酸以及至少一种编码以下中的至少一种的核酸：

a.所述外源性分支酸丙酮酸裂解酶ubiC，和

b.包含破坏性突变的所述预苯酸合成酶pheA。

7.根据权利要求3所述的细菌，其中所述细菌包含编码包含破坏性突变的所述预苯酸合成酶pheA的核酸；或所述细菌包含编码包含破坏性突变的所述预苯酸合成酶pheA的核酸和至少一种编码以下中的至少一种的核酸：

a.所述外源性异分支酸合成酶pchA，和

b.所述外源性异分支酸丙酮酸裂解酶pchB。

8.根据权利要求5至7中任一项所述的细菌，其中所述核酸是针对梭菌属中的表达而优化的密码子。

9.根据权利要求1至3中任一项所述的细菌，其中所述分支酸衍生物包含6元碳环，所述6元碳环被羧基或羧酸根阴离子取代并且进一步被一个或多个OH基团和/或一个或多个NH₂基团取代。

10.根据权利要求1至3中任一项所述的细菌，其中所述分支酸衍生物选自由以下组成的群组：对羟基苯甲酸、水杨酸、2-氨基苯甲酸、二羟基苯甲酸、4-羟基环己烷甲酸，和其盐和离子。

11.根据权利要求1或2所述的细菌，其中所述细菌表达ubiC的分支酸丙酮酸裂解酶并且产生对羟基苯甲酸的分支酸衍生物。

12.根据权利要求11所述的细菌，其中所述细菌进一步表达反馈不敏感型DAHP合成酶。

13.根据权利要求1至3中任一项所述的细菌，其中所述细菌表达pchA的异分支酸合成酶和pchB的异分支酸丙酮酸裂解酶，并且产生水杨酸的分支酸衍生物。