[发明专利]以高产量和滴度产生鼠李糖脂的半连续工艺

权利要求书

1.用于产生包含一种或多种鼠李糖脂的多个发酵产物的半连续方法，所述方法包括：

(a)在培养基中培养产生鼠李糖脂的微生物，所述培养基包括至少一种碳源如葡萄糖、脂肪醇、脂肪酸或植物油如橄榄油、菜籽油、橄榄油、玉米油、葵花油、芥花油和大豆油；至少一种氮源如NaNO₃、尿素和NH₄Cl；至少一种磷源如H₃PO₄和K₂HPO₄；至少一种镁源如MgSO₄*7H₂O和MgCl₂；至少一种钾源如KCl和KOH；至少一种硫源如H₂SO₄；至少一种氯源如KCl和NaCl及至少一种钠源如NaCl、NaNO₃和NaOH，以及任选存在地，乳化剂如阿拉伯胶、瓜尔豆胶和鼠李糖脂，所述培养进行约2至约5天以获得包含鼠李糖脂的第一发酵培养基；

(b)移出至少约70％的(a)中所获得的包含一种或多种鼠李糖脂的发酵培养基；

(c)用具有步骤(a)中所示的组成的培养基取代(b)中所移出的所述包含一种或多种鼠李糖脂的发酵培养基；

(d)重复步骤(a)-(c)至少一次以获得包含鼠李糖脂的后续发酵产物，

其中所述步骤(a)-(c)能够重复至少约30天，且其中所述方法还包括，任选地，向步骤(a)的所述培养基加入(1)包含一种或多种微量营养素的组合物，所述微量营养素的浓度不超过20mg/L微量营养素溶液，所述组合物以每天0.1％v/v总发酵体积加入，和/或(2)止泡剂如碳基或硅基止泡剂。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述产生鼠李糖脂的微生物是假单胞菌微生物，如铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeroginosa)。

3.如权利要求1-2所述的方法，其中所述乳化剂存在的量是约0.1-20％重量，所述碳源存在的浓度是约6-12％重量，所述氮源存在的量是约1-4g/L，所述磷源存在的量是约1-3g/L，所述镁离子存在的量是约0.001-0.2g/L，所述钾离子存在的量是约0.1-约1g/L，所述钠离子存在的量是约1-10g/L，所述氯离子存在的量是约0.1-1g/L，所述硫离子存在的量是约0.1-1g/L。

4.如权利要求1-3所述的方法，其中所述微量营养素是Fe盐如FeCl₃*6H₂O或FeSO₄，Mn盐如MnSO₄*H₂O和MnCl₂·4H₂O；Zn如ZnSO₄*7H₂O或ZnCl₂；Na盐如Na₃C₆H₅O₇*2H₂O、NaC₆H₇O₇和Na₂C₆H₆O₇或Cu盐如CuCl₂*2H₂O和CuSO₄*5H₂O。

5.如权利要求4所述的方法，其中所述Cu盐存在的量是约0.5-3g/L微量营养素溶液，所述Mn存在的量是约0.1-1.5g/L微量营养素溶液，所述Zn盐存在的量是约0.5g/L，所述Fe盐存在的量是约0.1-1g/L微量营养素溶液和/或所述钠盐存在的量是约1-5g/L微量营养素溶液。

6.如权利要求1-5所述的方法，其中连续加入所述微量营养素组合物。

7.如权利要求1-6所述的方法，其中每日加入所述微量营养素组合物。

8.如权利要求1-7所述的方法，其中所述假单胞菌在约30-37C的温度和/或约6-8.6的pH培养。

9.如权利要求1-8所述的方法，其中所述步骤(d)重复至少约30天。