[发明专利]ETV2及其用途

权利要求书

1.一种非人动物细胞或胚泡，其中基因组在ETV2基因的两个等位基因中都携带突变，从而所述非人动物细胞或胚泡缺乏功能性ETV2蛋白。

2.如权利要求1所述的非人动物或胚泡，其中所述突变是ETV2基因缺失。

3.如权利要求1或2所述的非人动物细胞或胚泡，其中所述非人动物细胞或胚泡是猪、牛、马或山羊。

4.嵌合非人动物或胚泡，其表达人ETV2并缺乏所述非人动物ETV2的表达。

5.如权利要求4所述的嵌合非人动物，其中所述非人动物表达选自白细胞、红细胞、血小板或其组合的人血细胞。

6.如权利要求4所述的嵌合非人动物，其中所述嵌合非人动物表达人内皮。

7.如权利要求4-6中任一项所述的嵌合非人动物，其中所述非人动物是猪、牛、马或山羊。

8.一种产生表达人ETV2基因的嵌合非人动物的方法，包括：

a)生成ETV2无效的非人动物细胞，其中非人ETV2基因的两个拷贝都携带防止在所述非人动物中产生功能性ETV2蛋白的突变；

b)通过体细胞核转移创建ETV2无效的非人胚泡，所述体细胞核转移包括将来自a)的所述ETV2无效的非人动物细胞的细胞核融合到去核的非人卵母细胞中，并激活所述卵母细胞分裂，从而形成ETV2无效的非人胚泡；

c)将人干细胞引入b)的所述ETV2无效的非人胚泡；以及

d)将来自c)的所述胚泡植入假孕替代非人动物，以生成表达人ETV2的嵌合非人动物。

9.一种在非人动物中产生人血细胞或血管和/或人源化血细胞或血管的方法，包括：

a)生成ETV2无效的非人动物细胞，其中非人ETV2基因的两个等位基因都携带防止产生功能性ETV2蛋白的突变；

b)通过体细胞核转移创建ETV2无效的非人胚泡或桑椹胚，所述体细胞核转移包括将来自a)的所述ETV2无效的非人动物细胞的细胞核融合到去核的非人卵母细胞中，并激活所述卵母细胞分裂，从而形成ETV2无效的非人胚泡；

c)将人供体干细胞引入b)的所述ETV2无效的非人胚泡；以及

d)将来自c)的所述胚泡或桑椹胚植入假孕替代非人动物，从而生成表达人血细胞或血管和/或人源化血细胞或血管的非人动物。

10.如权利要求8或9所述的方法，其中所述非人动物是猪、牛、马或山羊。

11.如权利要求8或9所述的方法，其中所述人供体干细胞是组织特异性干细胞、多能干细胞、专能成体干细胞、诱导多能干细胞或脐带血干细胞(UCBSC)。

12.如权利要求9所述的方法，其中所述提供干细胞的供体是所产生的人源化组织或器官的受体。

13.如权利要求9所述的方法，其中由成纤维细胞生成所述人诱导多能干细胞。

14.一种非人动物，其由权利要求8或9产生。

15.一种子代非人动物，其由权利要求8或9的方法生成的两个非人动物交配所产生，其中所述子代非人动物表达人ETV2，其中所述子代非人类的基因组携带所述非人动物ETV2基因的纯合缺失。

16.如权利要求15所述的子代非人动物，其中所述非人动物是猪、牛、马或山羊。

17.如权利要求9所述的方法，其中所述血细胞是人诱导多能干细胞衍生的或人脐带血干细胞-衍生的白细胞、红细胞和/或血小板。