[发明专利]经葡糖淀粉酶修饰的酵母菌株和用于产生生物产物的方法

权利要求书

1.一种工程化酵母，包含至少第一外源核酸、第二外源核酸、第三外源核酸和第四外源核酸，所述外源核酸各自包含编码与酵母属(Saccharomyces)菌种异源的共有葡糖淀粉酶多肽或编码彼此具有90％或更高序列同一性的两种或更多种不同葡糖淀粉酶多肽的序列，其中所述第一外源核酸、所述第二外源核酸、所述第三外源核酸和所述第四外源核酸具有彼此不同的核酸序列。

2.根据权利要求1所述的工程化酵母，其中与所述酵母属菌种异源的所述葡糖淀粉酶多肽来自酵母或真菌菌种。

3.根据权利要求2所述的工程化酵母，其中所述葡糖淀粉酶多肽来自选自下列的酵母或真菌生物：树脂枝孢霉(Amorphotheca resinae)、黑曲霉(Aspergillus niger)、泡盛曲霉(Aspergillus awamori)、米曲霉(Aspergillus oryzae)、川地曲霉(Aspergillus kawachii)、Aspergillus shirousami、Blastobotrys adeninivorans、白假丝酵母(Candida albicans)、米根霉(Rhizopus oryzae)、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)和扣囊复膜酵母(Saccharomycopsis fibuligera)。

4.根据权利要求1所述的工程化酵母，其中所述葡糖淀粉酶多肽为来自扣囊复膜酵母的葡糖淀粉酶多肽的酶促活性部分。

5.根据权利要求4所述的工程化酵母，其中所述葡糖淀粉酶多肽与SEQ ID NO:11具有90％或更高的序列同一性，并且任选地包含处于SEQ ID NO:11中一个或多个以下氨基酸位置处的一个或多个氨基酸取代：1M-5T、7F、9T、10A、15V、16A、18C、19V、21V、22E、24D、27N-30H、32Q、36G、38T、40A、42S-50E、52P、53A、56W、64D、71K-74K、77V、79V、86E、90F、97T、103S-106A、108V、111H、112S、114S、121V、127S-129T、131T、135V、141N、144S、145P、148D、157V、159D、160T、164A、165S、187A、189A-191H、193N、197L、199A-203G、205P、206Y、209A、210S、214W、215K、222Q、223H、225S-227H、229S-231S、242T、247A、251L、255S、257G-261S、263T-265N、267P、268P、270T-272W、274E-270A、281N、284I-286S、292S-295K、300S、302Q、304S、307G、316A、317A、319I、325D-329Y、333N、337S、341N、343L、345Y、348V、352N、355K、356I、358G、359N、361K、366V、377V、379T、386Q、393、G、395T、396F、398T、402N-411V、413E、415L、419L、420Y、422S、423F、425A、429K、431D、433S、435A、437K、440L、442L-444Y、448N-451N、453I-455S、457L、458Q、465K、467L、472D、474N、476Q、478T、480E、481I、487F-489A、492V、500S、503S、505N、507A、511L-513E和515L。

6.根据权利要求5所述的工程化酵母，其中所述葡糖淀粉酶多肽与SEQ ID NO:11具有95％或更高、96％或更高、97％或更高、98％或更高、或者99％或更高的序列同一性。

7.根据权利要求6所述的工程化酵母，其中所述葡糖淀粉酶多肽包含SEQ ID NO:11。

8.根据权利要求1所述的工程化酵母，其中所述第一外源核酸、所述第二外源核酸、所述第三外源核酸和所述第四外源核酸编码彼此具有95％或更高、96％或更高、97％或更高、98％或更高、或者99％或更高序列同一性的两种或更多种不同葡糖淀粉酶多肽。

9.根据权利要求1所述的工程化酵母，其中所述第一外源核酸、所述第二外源核酸、所述第三外源核酸和所述第四外源核酸编码各自与SEQ ID NO:11具有90％或更高序列同一性的两种或更多种不同葡糖淀粉酶多肽。