[发明专利]非免疫原性单结构域抗体

说明书

相关申请

本申请要求于2015年1月21日提交的美国临时申请号62/106,035的权益，所述美国临时申请的内容通过引用以其整体并入本文。

发明领域

本发明一般地涉及在人或人源化单结构域抗体片段（sdAb）内的修饰，所述修饰阻止通过预先存在的抗体的识别，涉及包括这些修饰的经分离的多肽及其方法和用途。

序列表的引入

于2016年1月20日创建且大小为10.0 KB的名称为“INHI018001WO_ST25”的文本文件的内容，通过引用以其整体并入本文。

发明背景

生物治疗剂的临床免疫原性可以限制功效并且促成不利事件。细胞和体液免疫原性两者在临床环境中都可以是有问题的。衍生自非人来源的抗体中最常观察到的免疫原性或其威胁已导致广泛的蛋白质工程和平台创新，以减轻潜在的免疫原性。这些包括人源化、人工程化（humaneering）、贴面化（veneering）和全人抗体平台的开发。然而，即使全人抗体和抗体片段也具有免疫原性的风险。免疫原性通常指向抗体的CDR区。相反，也观察到构架区定向的免疫原性，如单结构域抗体的情况。已注意到相当一部分人具有预先存在的针对单结构域抗体内的隐蔽表位的抗体。因此，存在生成非免疫原性单结构域抗体的需要。

发明概述

本发明的经修饰的单结构域抗体（sdAb）片段可以衍生自许多来源，包括但不限于V_HH、V_NAR、工程化V_H或V_K结构域。V_HH可以由仅骆驼科重链抗体及其文库生成。V_NAR可以由仅软骨鱼类重链抗体及其文库生成。已实施了从常规异源二聚体V_H和V_K结构域生成单体sdAb的各种方法，包括界面工程和特定种系家族的选择。在优选的实施方案中，本发明的经修饰的sdAb是人或人源化的。

预先存在的抗人单结构域抗体（sdAb）抗体（ASDA）最普遍以这样的形式观察到，其中sdAb被定位使得其具有游离羧基末端。本发明提供了在人或人源化sdAb区域内的突变，所述突变使ASDA识别失效。在本发明的一些实施方案中，sdAb在构架1区（FW1）内被改变或修饰。在其他实施方案中，sdAb在构架2区（FW2）内被改变或修饰。在其他实施方案中，sdAb在构架3区（FW3）内被改变或修饰。在其他实施方案中，sdAb在构架4区（FW4）内被改变或修饰。这些修饰包括突变、截短、延伸或其组合。在一些实施方案中，sdAb在单个区域内被修饰。在其他实施方案中，sdAb在多于一个区域处被修饰。例如，sdAb可以在构架1和构架4内被修饰。本发明的sdAb修饰使ASDA识别失效，而不显著降低蛋白质的结合亲和力、特异性、表达能力或稳定性。本文使用的所有编号均指Kabat编号。

下文显示了与人VH羧基末端残基（Leu/Thr108、Val109、Thr110、Val111、Ser112、Ser113；LVTVSS）比对的sdAb的构架4的示例性修饰：

108 LVTVSS 113（天然人VH序列，SEQ ID NO: 58）

108 LVEIK 112（SEQ ID NO: 1）

108 LVTVE 112（SEQ ID NO: 2）

108 LVTVSE 113（SEQ ID NO: 3）

108 LVTVEG 113（SEQ ID NO: 4）

108 LVTVSEG 114（SEQ ID NO: 5）

108 LVTVK 112（SEQ ID NO: 6）

108 LVTVS 112（SEQ ID NO: 7）

108 LVTVSK 113（SEQ ID NO: 8）

108 LVTVKG 113（SEQ ID NO: 9）

108 LVTVSKG 114（SEQ ID NO: 10）

108 LVTVSKPG 115（SEQ ID: NO 30）

108 LVTVSKPGG 116（SEQ ID: NO 31）

108 LVTVKP 113（SEQ ID: NO 32）