[发明专利]UDP-糖基转移酶

权利要求书

1. 一种能够产生甜菊醇糖苷的重组宿主，其包含编码多肽的重组核酸序列，所述多肽的氨基酸序列为在SEQ ID NO: 25中列出的氨基酸序列，且所述多肽具有与SEQ ID NO: 27中列出的氨基酸序列所示的多肽相比改善的UGT2活性，所述改善的UGT2活性导致产生更高量的甜菊醇糖苷。

2.根据权利要求1所述的重组宿主，其包含一个或更多个重组核苷酸序列，所述重组核苷酸序列编码：

具有对映-柯巴基焦磷酸合酶活性的多肽；

具有对映-贝壳杉烯合酶活性的多肽；

具有对映-贝壳杉烯氧化酶活性的多肽；以及

具有贝壳杉烯酸13-羟化酶活性的多肽。

3.根据权利要求1或2所述的重组宿主，其包含重组核酸序列，所述重组核酸序列编码具有NADPH-细胞色素p450还原酶活性的多肽。

4.根据权利要求1或2所述的重组宿主，其包含编码以下中的一种或更多种的重组核酸序列：

（i）具有UGT74G1（UGT3）活性的多肽；

（ii）具有UGT85C2（UGT1）活性的多肽；以及

（iii）具有UGT76G1（UGT4）活性的多肽。

5.根据权利要求1或2所述的重组宿主，其包含重组核酸序列，所述重组核酸序列编码具有UGT2活性的额外多肽。

6.根据权利要求1或2所述的重组宿主，其中所述宿主属于以下属中的一种：酵母属（Saccharomyces）、曲霉属（Aspergillus）、毕赤酵母属（Pichia）、克鲁维酵母属（Kluyveromyces）、假丝酵母属（Candida）、汉逊酵母属（Hansenula）、腐质霉属（Humicola）、伊萨酵母属（Issatchenkia）、毛孢子菌属（Trichosporon）、酒香酵母属（Brettanomyces）、管囊酵母属（Pachysolen）、耶氏酵母属（Yarrowia）、Yamadazyma或埃希氏杆菌属（Escherichia）。

7. 根据权利要求6所述的重组宿主，其中所述重组宿主是酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）细胞、解脂耶氏酵母（Yarrowia lipolitica）细胞、克鲁斯假丝酵母（Candida krusei）细胞、东方伊萨酵母（Issatchenkia orientalis）细胞或大肠杆菌（Escherichia coli）细胞。

8.根据权利要求1或2所述的重组宿主，其中所述宿主产生香叶基香叶基二磷酸（GGPP）的能力被上调。

9.根据权利要求1或2所述的重组宿主，其包含一个或更多个重组核酸序列，所述重组核酸序列编码羟甲基戊二酰基-辅酶A还原酶、法尼基-焦磷酸合成酶和香叶基香叶基二磷酸合酶。

10.根据权利要求1或2所述的重组宿主，其包含编码以下中的一种或更多种的核酸序列：

具有羟甲基戊二酰基-辅酶A还原酶活性的多肽；

具有法尼基-焦磷酸合成酶活性的多肽；

具有香叶基香叶基二磷酸合酶活性的多肽。

11.一种用于制备糖基化二萜的方法，所述方法包括在合适的发酵培养基中发酵根据权利要求1至10中任一项所述的重组宿主，并且任选地回收所述糖基化二萜。

12.根据权利要求11所述的方法，其用于制备糖基化二萜，其中所述方法以工业规模进行。