[发明专利]用于大疱性表皮松解症治疗的与COL7A1外显子73配对的寡核苷酸

说明书

本发明涉及能够防止或减少外显子73包含到人COL7A mRNA中的反义寡核苷酸，其以多种方式进行表征：(a)寡核苷酸的序列包含至多两个CpG序列；(b)寡核苷酸的长度不多于24个核苷酸；(c)寡核苷酸能够与外显子73中的(SRp40/SC35结合/ESE)元件退火。这些寡核苷酸可有用地为具有修饰的核苷间键(例如硫代磷酸酯键)的寡核糖核苷酸。

相关申请的交叉引用

本申请要求2015年3月11日提交的英国专利申请1504124.7的优先权，在此出于所有目的将其全部内容并入本文以供参考。

技术领域

本发明涉及适用于治疗人类疾病的寡核苷酸。更具体地，本发明涉及适用于治疗营养不良型大疱性表皮松解症的反义寡核苷酸。

背景技术

大疱性表皮松解症(EB)是一组可遗传的皮肤疾病，其特征在于皮肤和黏膜的慢性脆性和起疱。根据亚型，EB的症状范围非常广，从最小的皮肤脆性到具有全身并发症的非常严重的症状。全球约35万患者受影响。在某些形式的EB中，还可以涉及指甲、头发和牙齿。EB的主要类型包括单纯型EB(EBS)、交界型EB(JEB)、营养不良型EB(DEB)和金德乐综合征(KS)。

DEB影响约25％的EB患者，可显性或隐性遗传，并涉及VII型胶原蛋白(COL7A1，联机孟德尔人类遗传数据库(omim)120120)缺陷。COL7A1编码胶原蛋白VII的α-1链。胶原蛋白VII用作真皮上部到致密板(基底膜的部分)的锚原纤维。在翻译后修饰之后，三个相同的α-1链借助它们的胶原三螺旋结构域折叠在一起。随后，形成反向平行二聚体，其排列以形成锚原纤维。胶原蛋白VII由角质形成细胞和真皮成纤维细胞在皮肤中合成。DEB疾病严重程度与在基底膜区域的VII型胶原蛋白表达量大体相关。

显性营养不良型EB(DDEB)的特点包括可局限于手、脚、肘和膝盖或可以是全身性的起疱。常见的发现包括瘢痕、粟粒疹、黏膜受累、和异常或缺失指甲。隐性营养不良型EB(RDEB)通常比DDEB更具全身性且更严重。除了DDEB的发现之外，RDEB的其他常见表现包括营养失调、贫血、骨质疏松、食管狭窄、生长迟缓、蹼化或引起连指手套状并指(并指(趾)畸形(pseudosyndactyly))的手指和脚趾的融合、形成肌肉挛缩、牙齿畸形、小口畸形和眼睛瘢痕化。在该组中，鳞状细胞癌的风险以及来自转移性鳞状细胞癌的死亡大大增加。

在基因COL7A1内已知有多于400种不同的突变。最普遍受影响的外显子中的一个(18％的患者)是具有约40种已知突变的外显子73，该突变大多数通常是错义突变或导致提前终止密码子(PTC)和甘氨酸取代的突变。

目前不存在对DEB的治疗，只能进行缓和疗护。严重形式的RDEB对社会医疗保健预算造成高昂的费用：每名患者每年的敷料和药物的平均费用约为20万欧元。

法国国家健康与医学研究院(Institut National de la Santé et de laRecherche Médicale)(INSERM)的WO2013/053819公开了靶向外显子73、导致整个外显子从mRNA跳跃的两种反义寡核苷酸。缺乏外显子73的mRNA被翻译成功能性多肽，该功能性多肽虽然比wt蛋白质短，但其表现与野生型胶原蛋白VIIa非常相似。公开的一种寡核苷酸长度为25个核苷酸，显示出69％的跳跃效率，而另一种寡核苷酸长度为30个核苷酸，显示出93％的跳跃效率。

发明内容

尽管WO2013/053819中更长的外显子跳跃AON似乎显示出令人满意的外显子跳跃效率，但是从开发这种用于人类治疗用途的分子的角度来看，其长度和一些其他特点使其不太优选。此外，似乎这种寡核苷酸产生既不代表野生型也不代表不含外显子73的mRNA的中间条带。尽管不知道这些条带是否具有临床相关性，但是从监管和安全性的角度来看，产生副产物不太优选。因此，仍然需要另外的改进的治疗DEB的疗法。