[发明专利]结合型氨基酸的旋光性分析方法及旋光性分析系统

说明书

本发明的结合型氨基酸的旋光性分析方法包括：使用氘代盐酸重水溶液及/或重水对结合型氨基酸进行水解的步骤；对通过所述水解所生成的氨基酸的D异构体与L异构体进行光学拆分的步骤；自所述光学拆分的氨基酸生成碎片的步骤；自所述生成的碎片中通过质量分析而选择包含α碳且不包含侧链的规定的碎片,并进行解析的步骤。

技术领域

本发明涉及一种结合型氨基酸的旋光性分析方法及结合型氨基酸的旋光性分析系统。

背景技术

结合型氨基酸是氨基酸通过酰胺键(肽键)链状键结所形成的化合物，在生物体内以蛋白质或肽的形式存在，其与糖、脂质等同样，是一重要成分。氨基键结于键结有羧基的碳(α碳)而成的α-氨基酸，除了甘氨酸以外，是具有以α碳作为光学中心的光学异构物的D异构体、L异构体的旋光性分子。以往认为，生物体内存在的结合型氨基酸的大部分由L-氨基酸构成，作为其光学异构物的D-氨基酸仅存在于细菌的细胞壁的肽聚糖的构成成分等极其有限的生物体分子。

然而，近年来，随着具有识别D-氨基酸及L-氨基酸的能力的旋光性分析技术的发展，逐渐阐明了以微生物或植物为首，哺乳动物中亦存在各种D-氨基酸，可对生理现象造成影响。

关于包括蛋白质在内的结合型氨基酸的氨基酸残基的鉴定或定量，一般而言，对使用热或酸发生水解而生成的氨基酸，使用层析法等分离技术，但在所述过程中可能会产生以D异构体与L异构体互相转换的异构化为因的人工产物，而对内在性旋光性分子的准确分析造成障碍。

非专利文献1中公开了一种旋光性分析方法，其中使用氘代盐酸使蛋白质水解后，使用具备旋光性管柱的LC/ESI-MS/MS(liquid chromatography/electrosprayionization-tandem mass spectrometry，液相色谱/电喷雾电离-串联质谱仪)，算出氨基酸残基的D异构体与L异构体的比率(％D：D/(D+L))。此时，关于水解过程中异构化的氨基酸，由于键结于α碳的氢原子被氘原子取代，因此在包含α碳的离子的质量分析中，利用质荷比不同的特点，与未异构化的氨基酸进行区分。

[先前技术文献]

[非专利文献]

非专利文献1：T.Miyamoto,M.Sekine,T.Ogawa,M.Hidaka,H.Homma,H.Masaki:Generation of Enantiomeric Amino Acids during Acid Hydrolysis of PeptidesDetected by the Liquid Chromatography/Tandem Mass Spectroscopy,Chem.Biodivers.,7,1644-1649(2010).

发明内容

本发明要解决的课题

然而，非专利文献1记载的方法中，具有侧链的氨基酸残基其侧链中包含的氢原子也有可能被氘原子取代，而在质量分析中，对于侧链中包含的氢原子经氘原子取代的人工产物、及键结于α碳的氢原子经氘原子取代的人工产物无法进行区分。因此会造成对结合型氨基酸中内在的微量的氨基酸残基进行旋光性分析时，导致其准确度明显降低的问题。

对此，本发明的一形态鉴于上述现有技术所具有的问题，其目的在于提供一种能够以较高的准确度识别结合型氨基酸的分析过程中产生的人工产物、及结合型氨基酸中内在的D-氨基酸残基及/或L-氨基酸残基结合型氨基酸的旋光性分析方法及旋光性分析系统。

解决上述课题的手段

根据本发明的一形态，提供一种结合型氨基酸的旋光性分析方法，其特征在于具有：使用氘代盐酸重水溶液及/或重水使结合型氨基酸水解的步骤；对通过所述水解所生成的氨基酸的D异构体与L异构体进行光学拆分的步骤；自所述光学拆分的氨基酸生成碎片的步骤；自所述生成的碎片中通过质量分析选择包含α碳且不包含侧链的规定的碎片并进行解析的步骤。