[发明专利]破坏丙酮酸激酶M2和整合素相互作用的分子和其用途

说明书

相关申请

本申请要求2015年2月月26日提交的美国临时专利申请第62/121,338号的权益，所述申请以全文引用的方式并入本文。

技术领域

本发明所公开的主题大体上涉及用于治疗与受试者的异常整合素αvβ3表达相关联的疾病的组合物和方法。更具体地说，方法涉及向受试者投予有效量的包含抑制PKM2与整合素αvβ3结合的丙酮酸激酶异构体M2(PKM2)拮抗剂的组合物。

背景技术

现在存在大量的和有说服力的数据主体，其支持整合素α_vβ₃在激活巨噬细胞依赖性炎症、破骨细胞产生、迁移和骨吸收和发炎性血管生成中起重要作用。所有这些过程在类风湿性关节炎(RA)和相关关节病的发病机理中起重要作用。因此，需要特异性抑制异常整合素α_vβ₃活性的试剂。

发明内容

如本文中所公开的，丙酮酸激酶异构体M2(PKM2)通过作用于整合素α_vβ₃促进肌成纤维细胞分化。因此，公开方法用于破坏或阻止PKM2和整合素α_vβ₃的相互作用。方法涉及向受试者投予有效量的包含抑制PKM2与整合素α_vβ₃结合/相互作用的PKM2拮抗剂的组合物。PKM2拮抗剂可为通过在整合素相互作用位点处或靠近所述位点结合PKM2有效地抑制此相互作用的任何分子。举例来说，PKM2拮抗剂可为抗体(例如人类化抗体或片段)、小分子、肽或肽模拟物。

所公开的组合物和方法可用于治疗涉及异常整合素α_vβ₃表达的任何疾病或病况。举例来说，在一些实施例中，方法治疗纤维化疾病，如动脉粥样硬化、哮喘、心脏纤维化、肌肉纤维化、胰腺纤维化、骨髓纤维化、间质性肝纤维化、肝硬化和胆囊硬化、硬皮病、肺纤维化、弥漫性实质性肺病、特发性间质纤维化、间质性肺炎、落屑性间质性肺炎、呼吸道细支气管炎、间质性肺病、急性间质性肺炎、非特异性间质性肺炎、隐源性机化性肺炎、淋巴球性间质性肺炎、肾纤维化或慢性肾病。在一些实施例中，方法抑制或防止受试者病灶的纤维化和/或疤痕。

在一些实施例中，方法治疗骨质疏松。骨质疏松通过激活的破骨细胞活性由过度活性骨吸收引起。激活破骨细胞表达高水平的整合素α_vβ₃。胞外PKM2可能在破骨细胞活化和细胞凋亡耐药中起作用。因此，所公开的PKM2拮抗剂可对于骨质疏松治疗有效。

在一些实施例中，方法治疗类风湿性关节炎(RA)、相关风湿性疾病和关节病或自身免疫疾病。这些疾病均与通过活化整合素α_vβ₃信号传导的巨噬细胞的活化有关。

此外公开的为包含特异性破坏丙酮酸激酶异构体M2(PKM2)与整合素α_vβ₃结合的中和抗体(例如人类化抗体或片段)和药学上可接受的载剂的医药组合物。

在附图和下文描述中阐述本发明公开的主题的一个或多个实施例的细节。本发明所公开的主题的其它特征、目标和优点将从描述和图式且从权利要求书而显而易见。

附图说明

图1示出了促进肌成纤维细胞分化的PKM2的图像，其包括其中通过α-SMA的免疫印迹(IB:α-SMA)分析在HDFa细胞中的α-SMA的细胞水平的图1A，用抗-α-SMA(绿色)、罗丹明毒伞素(红色)和DAPI(蓝色)的HDFa细胞的IF染色的代表性图像的图1B，其中用在左侧示出的细胞用指示试剂处理的图1C，其中通过免疫印迹分析在通过指示的试剂处理的HDFa细胞中磷酸化Smad2、Smad2/3和α-SMA的细胞水平(IB:p-Smad2、IB:Smad2/3和IB:α-SMA)的图1D。

图2包括示出胞外PKM2激活整合素α_vβ₃信号传导的曲线和图像。来自rPKM2-HDFa的下拉交联带的His-标记的胰蛋白酶分解的肽片段(带下划线的)通过匹配整合素β₃和PKM2的氨基酸序列的MALDI-tof/tof交联和分析。

图3包括示出在存在5μg/ml的LM609(空白棒)或BSA(填充棒)的情况下HDFa细胞附着到缓冲液、rPKM1和rPKM2涂布的板的条形图。附着表示为每个视场附着到板的细胞的总数。误差棒为五次独立实验的测量结果的标准差。