[发明专利]鼠李糖脂合成

权利要求书

1.生产至少一种鼠李糖脂的方法，其包括：

（a）使重组细胞与含有碳源的培养基接触，

其中所述重组细胞已进行遗传修饰，使得与所述细胞的野生型相比，所述细胞具有酶E₁、E₂和E₃的增加的活性，其中所述酶E₁是α/β水解酶（RHlA），所述酶E₂是鼠李糖基转移酶I（RHlB），并且所述酶E₃是鼠李糖基转移酶II（RHlC），和

其中所述碳源是包含6-10个碳原子的烷烃和/或链烷酸，并且所述鼠李糖脂包含通式（I），

式（I）

其中，

m = 2、1或0，特别是1或0，

n = 1，

R¹和R²= 彼此独立地具有2至24的相同或不同的有机基团，任选支化的、任选取代的、羟基取代的、任选不饱和的、或任选单不饱和、双不饱和或三不饱和的烷基。

2.根据权利要求1的方法，其中

- 所述烷烃可以选自己烷、庚烷、辛烷、壬烷和癸烷；和/或

- 所述链烷酸可以选自己酸、庚酸、辛酸、壬酸和癸酸。

3.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述细胞已进行遗传修饰，使得与所述细胞的野生型相比，所述细胞具有酶E₄氧化还原酶的增加的活性。

4.根据权利要求3的方法，其中所述氧化还原酶选自alkB型氧化还原酶、单加氧酶和NAD(P)H依赖性醇脱氢酶（ADH）。

5.根据前述权利要求中任一项的方法，其中与所述细胞的野生型相比，所述重组细胞具有所述酶E₁、E₂和E₃以及氧化还原酶的增加的活性，并且其中所述碳源是己烷和/或癸烷。

6.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述培养基中的总碳含量按重量计的40%是己烷、癸烷、己酸和/或癸酸。

7.根据前述权利要求中任一项的方法，其中

- 所述酶E₁能够催化3-羟基烷酰基-ACP经由3-羟基烷酰基-3-羟基链烷酸-ACP转化为羟基烷酰基-3-羟基链烷酸，

- 所述酶E₂能够催化dTDP-鼠李糖和3-羟基烷酰基-3-羟基链烷酸转化为α-L-吡喃鼠李糖基-3-羟基烷酰基-3-羟基链烷酸；和

- 所述酶E₃能够催化dTDP-鼠李糖和α-L-吡喃鼠李糖基-3-羟基烷酰基-3-羟基链烷酸转化为α-L-吡喃鼠李糖基-(1-2)-α-L-吡喃鼠李糖基-3-羟基烷酰基-3-羟基链烷酸。

8.根据前述权利要求中任一项的方法，其中

- 所述酶E₁包含选自SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6的氨基酸序列及其片段，

- 所述酶E₂选自SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11及其片段，和

- 所述酶E₃选自SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15及其片段，

其中所述片段包含多肽序列，在所述多肽序列中与各个酶的序列相比，高达25%的氨基酸基团通过缺失、插入、取代或其组合进行修饰，并且所述片段包含所述各个酶的至少10%的酶促活性。

9.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述细胞选自以下属：曲霉属、棒状杆菌属、短杆菌属、芽孢杆菌属、不动杆菌属、产碱杆菌属、乳杆菌属、副球菌属、乳球菌属、假丝酵母​​属、毕赤酵母属、汉逊酵母属、克鲁维酵母属、酵母属、埃希氏菌属、发酵单胞菌属、耶氏酵母属、甲基杆菌属、罗尔斯通氏菌属、假单胞菌属、红螺菌属、红杆菌属、伯克霍尔德氏菌属、梭菌属和贪铜菌属。