[发明专利]快速精确分配、可视化和分析单个细胞的方法

权利要求书

1.一种细胞分配的方法，包括：

a)将第一分配体积的细胞悬液分配到多孔装置的多个孔中的每个孔中，

其中所述细胞悬液包含细胞，所述细胞以一定浓度存在于所述细胞悬液中使得所述第一分配体积中平均存在X个细胞，和

其中用液体分配系统进行所述分配；

b)在所述分配之前和/或之后用第一可检测标记物标记至少一部分的所述细胞；以及

c)用图像分析软件确定所述多个孔的至少一些孔中每孔中存在的细胞数量，

其中确定所述多个孔的至少一些孔中具有零个细胞或多于一个细胞；

d)基于所确定的结果用图像分析软件产生分配图文件；以及

e)根据所述分配图文件将试剂选择性地分配到所述多个孔的一些孔中而不是全部孔中，

其中，所述试剂分配到确定具有且仅具有一个细胞的至少一个孔中。

2.根据权利要求1所述的方法，其中X是1至20个细胞。

3.根据权利要求1所述的方法，其中X是1。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述多个孔的至少一个孔中的细胞数量确定为0。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述多个孔的至少一个孔中的细胞数量是0至40。

6.根据权利要求1所述的方法，在步骤c)之后，还包括：将第二分配体积的所述细胞悬液分配到确定为具有少于X个细胞的至少一些所述孔中。

7.根据权利要求6所述的方法，在第二分配体积的分配步骤之后或同时，还包括：将等于所述第二分配体积但不含细胞的第一附加体积分配到确定为具有X个细胞或多于X个细胞的至少一些所述孔中。

8.根据权利要求6所述的方法，在第二分配体积的分配步骤之后，还包括：再次确定先前确定为具有少于X个细胞的每个孔中存在的细胞数量。

9.根据权利要求8所述的方法，在再次确定步骤之后，还包括：将第三分配体积的所述细胞悬液分配到确定为具有少于X个细胞的孔中。

10.根据权利要求9所述的方法，在第三分配体积的分配步骤之后或同时，还包括：将等于所述第三分配体积但不含细胞的第二附加体积分配到确定为具有X个细胞或多于X个细胞的至少一些所述孔中。

11.根据权利要求1所述的方法，还包括：在所述细胞悬液的分配和/或确定步骤之前和/或之后用第二可检测标记物标记至少一部分的所述细胞。

12.根据权利要求11所述的方法，还包括：确定所述多个孔中哪些孔，如果有的话，含有具有所述第二可检测标记物的细胞。

13.根据权利要求1所述的方法，其中所述步骤c)包括使所述多个孔的至少一些孔的每个孔中的所述第一可检测标记物可视化。

14.根据权利要求1所述的方法，其中所述步骤c)包括使用图像捕获系统捕获所述多个孔的至少一些孔的第一图像，其中所述第一图像指示存在于所述第一图像中的每个孔中的细胞数量。

15.根据权利要求14所述的方法，其中所述图像捕获系统包括与放大镜连接的照相机。

16.根据权利要求15所述的方法，其中所述图像捕获系统还包括计算机，其中所述计算机包括计算机处理器、计算机存储器和图像分析软件。

17.根据权利要求16所述的方法，其中所述图像分析软件被配置为分析所述第一图像并产生：i)哪些孔含有少于X个细胞的第一列表；ii)哪些孔含有X个细胞的第二列表；和iii)哪些孔含有多于X个细胞的第三列表。