[实用新型]TNF-α时间分辨荧光免疫层析定量检测试剂盒

说明书

本实用新型公开了一种TNF‑α时间分辨荧光免疫层析定量检测试剂盒，包括试纸条和样品稀释液，在试纸条或样品稀释液中含有时间分辨荧光微球标记的抗TNF‑α第一抗体，试纸条检测线带T位置包被有抗TNF‑α第二抗体；试剂盒还包括独立反应的C线系统：在试纸条或样品稀释液中含有时间分辨荧光微球标记抗IgY抗体，质控带C线位置包被IgY，最终以T/C计算结果。本实用新型制备的试剂盒具有准确度高、重复性好、特异性强、操作简单等优点。

技术领域

本实用新型属于免疫检测领域，具体涉及TNF-α时间分辨荧光免疫层析定量检测试剂盒的结构与组成。

背景技术

肿瘤坏死因子，简称TNF-α，是由巨噬细胞分泌的一种小分子蛋白。肿瘤坏死因子α(TNF-α)主要由单核一巨噬细胞分泌；TNF-β主要由活化的T淋巴细胞分泌，两者有相似致热性。小剂量呈单峰热，大剂量呈双峰热；TNF在体内外均能刺激IL-1的产生。

人类的TNF-α基因长约2.76kb，小鼠为2.78kb，结构非常相似，均由4个外显子和3个内含子组成，与MHC基因群密切连锁，分别定位于第6对和第17对染色体上。1984年从 HL-60、U937等细胞中克隆成功rHu TNF-αcDNA，并在大肠杆菌中获得高表达。人TNF-α前体由233个氨基酸残基组成，含76个氨基酸残基的信号肽，切除信号肽后成熟型TNF-α为 157氨基酸残基，非糖基化，第69位和101位两个半胱氨酸形成分子内二硫键。rHu TNF- α分子量为17kDa。成熟的小鼠TNF-α与rMu TNF-α有79％氨基酸组成同源性，TNF-α的生物学作用似无明显的种属特异性。

TNF-α参与了多种体内的生物学过程，能够杀伤或抑制肿瘤细胞，提高中性粒细胞的吞噬能力，抗病毒细菌感染，促进髓样白血病细胞向巨噬细胞分化等。应用TNF-α在治疗肿瘤等方面开始临床II期试验，也可与IL-2联合治疗肿瘤，目前认为全身用药的疗效不及局部用药，后者如病灶内注射，局部浓度高且副作用也较轻。近年来已采用TNF基因治疗开始对黑素瘤等肿瘤进行临床验证。TNF-α还与一些临床某些疾病的病变程度有关，例如大骨节病、结肠炎、脑膜炎以及哮喘等等，临床上可通过检测TNF-α等生化指标来分析疾病的发生程度。

目前检测TNF-α的方法主要为ELISA法。但ELISA检测方法也存在一些不足：检测过程中为开放方式，容易引起各种试剂之间的交叉污染；检测时间较长，不能完全满足临床上的快速诊断的需求；不能及时对单个样本检测，检测结果存在滞后性等。免疫层析(lateralflow immunoassay，LFIA)快速检测试纸条多以胶体金、彩色乳胶微球或者荧光素作为标记物。基于胶体金标记技术开发的快速检测产品，存在灵敏度低，只能定性或者半定量，批间差异较大等问题；彩色乳胶微球虽然批间差有所改进，但灵敏度依然较低，也只能定性或半定量；基于荧光素标记技术的免疫层析灵敏度有了较大提高，也能进行定量检测，但是由于样本中含有较高的荧光本底信号，且stock位移较小，会对检测产生较大的影响。

时间分辨荧光(Time-resolved Fluorescence，TRF)是一种非同位素荧光标记物，与普通荧光相比，具有stock位移大，荧光寿命长等特点，可以有效的避免样品中的本底荧光，以及激发光等杂散光的影响，因此相比普通荧光具有更高的灵敏度和抗干扰能力。

目前还未有一种TNF-α时间分辨荧光免疫层析定量检测试剂盒。

实用新型内容

本实用新型的目的在于克服现有技术的不足之处，提供一种TNF-α时间分辨荧光免疫层析定量检测试剂盒。采用该试纸条进行TNF-α检测具有较高的灵敏度和特异性，和更短的获得检测结果的时间和更简便的操作方式。

本实用新型的技术方案为：一种TNF-α时间分辨荧光免疫层析定量检测试剂盒，它利用时间分辨荧光微球标记抗TNF-α第一抗体，并在检测线带T位置包被抗TNF-α第二抗体来检测，并加独立反应的C线系统：荧光微球标记抗鸡IgY抗体，质控带C线位置包被鸡IgY，最终以T/C计算结果。