[实用新型]一种快速检测猫疱疹病毒I型的PCR检测试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型涉及病毒检测领域，特别涉及一种快速检测猫疱疹病毒I型的PCR检测试剂盒，适用于猫疱疹病毒I型的流行病学监测、猫疱疹病毒I型的检测及基因工程技术等领域。

背景技术

猫疱疹病毒1型(Feline herpesvirus type1,FHV1)属于疱疹病毒科，甲型疱疹病毒亚科，由Crandell和Maurer于1958年首次分离到，是猫传染性鼻气管炎的病原。FHV1可引起猫的急性、高度接触性的上呼吸道感染，发病率很高，可达100％。虽然成年猫感染后大多痊愈，病死率很低，但幼仔猫感染后症状严重，病死率可达50％，甚至终生带毒排毒，并可垂直传播，危害很大。

猫可较好的耐受麻醉和一般手术,手术时能保持正常血压。在药品的降压物质检查中,猫作为中国药典规定的实验动物,越来越多的被用于形觉波剥夺性弱视、食管病等研究。猫作为实验动物,虽然应用越来越广泛,但国内目前尚未见有开展猫的检测。虽然早在1999年,蒋虹等就建立过猫鼻气管炎病毒血清学检测方法,2010年刘宝山等、林颖等先后以猫传染性鼻气管炎疫苗为模板建立了FHV-1PCR检测方法,但均没有推广开,实验用猫到目前为止也没有标准化规定。目前,实验用猫也多是从商贩或收购型饲养场购买,其来源混杂,遗传、年龄、微生物和寄生虫等携带情况不清,实验重现性差,结果隐存着未知因素的影响。FHV-1是目前已知最重要的猫呼吸道疾病之一,其发病率和死亡率均较高,严重危害猫的健康。

猫在患有几种主要疾病时的临床症状相似，并常有混合感染，给诊断造成困难。传统病毒病的诊断需要进行病毒分离，细胞培养，电镜观察以及免疫检测等方法，缺乏对病毒进行快速、准确、敏感的检测方法。PCR方法具有操作简单、特异、快速、敏感等优点，正逐步应用于病原微生物的检测与研究中。鉴于此，本试验建立了FHV1的快速PCR检测试剂盒，为临床检测提供了保障。

参考文献:

1、蒋虹,时建东,吴小闲.猫病毒血清学检测方法的建立及初步应用[J].中国实验动物学杂志,1999,9(1):39-41.

2、刘宝山,林颖,尹荣焕,等.猫疱疹病毒1型PCR检测方法的建立[J].畜牧与兽医,2010,42(1):74-76.

3、林颖,刘宝山,任会军,等.猫传染性鼻气管炎PCR检测方法的建立[J].现代畜牧兽医,2010,44(8),71-73.

实用新型内容

为了解决现有技术中存在的问题，本实用新型的目的是提供一种省时省力，特异性和敏感性优异，猫疱疹病毒I型的PCR检测试剂盒，可用于疱疹病毒I型的早期诊断。该试剂盒的建立和应用对今后开展实验用猫的检测工作及实验用猫标准化研究具有积极的促进作用，同时通过对猫疱疹病毒携带情况的检测，为猫质量控制标准的制定提供参考依据。

为实现上述目的，本实用新型采取的技术方案为：一种快速检测猫疱疹病毒I型的PCR检测试剂盒，包括有包装盒，内衬，在内衬上设有数个定位孔，通过定位孔将试剂管安装定位其内部，所述试剂管包括并列安装的：PCR扩增反应液管，阴性对照管、阳性对照管；

优选的，所述的PCR扩增反应液管中包括正向引物、反向引物、dNTPs、耐热DNA聚合酶、PCR缓冲液和水。

优选的，所述的阴性对照管中阴性对照为无菌ddH₂O；

优选的，所述阴性对照管为红色，阳性对照管为蓝色。

所述的核苷酸序列为：

上游引物为5’-GCGAAGTACCTGGTCAGAGCG-3’；

下游引物为5’-TTGCGTAGTGCGTGAATTAGC-3’

其中，所述的阳性对照为：分离辉瑞妙三多疫苗605株构建的质粒。

所述的阴性对照是蒸馏水。

PCR反应程序为：95℃3min；95℃30s,58℃30s,72℃40s,35Cycle；72℃10min；4℃∞。

判定结果：如果从待检测的样品中扩增到了518bp片段，则该检测样品含有猫疱疹病毒I型。

本实用新型所述对可能存在于生物样品中的传染病病原体进行检测的试剂盒，对比现有技术的优点在于：

(1)检测速度快，效率高，可根据需要检测病原体；

(2)以本实用新型所设计的试剂盒采用PCR检测方法对FHV1进行检测，检测结果均为阳性，而对其他常见猫源性病毒检测结果均为阴性，具有特异性强、灵敏度高、重复性好等优点。

(3)操作简单，结果稳定；