[实用新型]海藻酸钠水凝胶支架构建的组织工程皮肤

说明书

技术领域

本实用新型涉及组织皮肤敷料领域。

背景技术

皮肤是人体面积最大的器官，是重要的保护屏障，还具有感觉、保护、调解体温等重要生理功能。当正常皮肤组织在外界致伤因素(烧伤、创伤等)及机体内在因素(营养不良、缺氧和感染等)作用导致的损害形成创面，表现为皮肤完整性的破坏、正常组织的缺失和皮肤功能的丧失。

临床上常见创面有烧伤、创伤等重大疾病，瘢痕、皮肤色素性疾病、良性恶性肿瘤等手术切除后形成的皮肤缺损等急性创面，还有如糖尿病性溃疡、血管性溃疡、压力性溃疡、放射性溃疡、肿瘤性溃疡、瘢痕性溃疡、神经性溃疡等慢性创面。

手术修复是目前治疗创面的主要方法，但是，无论是传统的皮片移植、皮瓣移植、邮票皮移植、微粒皮移植、网状皮移植、复合皮移植等，还是目前的组织工程皮肤，目前都未能有效的解决创面修复的难题。尤其是重大疾病烧伤患者康复后往往瘢痕增生，汗腺缺失，皮肤失去原有的功能，生活质量低下；慢性创面则迁延不愈，轻者极大消耗医疗资源，重者并发感染、脓毒血症等严重危害生命。

实用新型内容

本实用新型目的在于提供一种组织工程皮肤，以解决上述技术问题的至少一个，也即是解决上述提及的创面修复难的问题。

本实用新型的另一个目的在于提供上述组织工程皮肤的制备方法，以解决上述技术问题的至少一个。

根据本实用新型的一个方面，提供了一种海藻酸钠水凝胶支架构建的组织工程皮肤，自上而下由表皮层和真皮层组成，

表皮层是位于真皮层上方的一层种子细胞，

真皮层包括种子细胞和海藻酸钠水凝胶支架，种子细胞位于海藻酸钠水凝胶支架的表面和支架中，以形成皮肤附属器。

在一些具体的实施方式中，上述种子细胞可以是表皮干细胞或通过人工培养得到的表皮基底层细胞悬液。

在一些具体的实施方式中，上述表皮基底层细胞悬液可以通过以下方法制备得到：取人工皮片，将皮片放置于消化酶溶液中消化15～25分钟，再将自体皮片取出，并放入至乳酸钠林格氏液中，中和酶反应，撕下皮片的表皮，在皮片基底层上刮削基底层细胞，用乳酸钠林格氏液冲洗收集挂下的基底层细胞，制得表皮基底层细胞悬液。

在一些具体的实施方式中，海藻酸钠水凝胶支架可以通过以下方式制备得到：

(1)如下式所示，将4～6g的BLG-NCA单体溶解于80～100mL的苯-二氧六环混合溶剂中，以ω-端氨基聚乙二醇为引发剂，室温反应60～72小时，将反应液倒入无水乙醇中沉淀，过滤，真空干燥得淡黄色半透明状固体，得PEG-PBLG(PEG即聚乙二醇，PBLG即聚γ-苄基L-谷氨酸)嵌段共聚物，

苯-二氧六环混合溶剂中苯与二氧六环的体积比为4:1，BLG-NCA单体与ω-端氨基聚乙二醇的摩尔比为70～80:1，反应液与无水乙醇的体积比为1:20～30；

(2)将步骤(1)所得的PEG-PBLG嵌段共聚物溶于水中，使其浓度大于1g/20ml，搅拌下加入EGF(表皮生长因子)原液至溶液中的EGF达到最大容量为止，静置4～12小时，使EGF包埋于PEG-PBLG形成的球形纳米粒中；

亲水的PEG和疏水的PBLG复合形成两亲性聚合物，在水介质中自动发生定向排列，当高于一定浓度(1g/20ml)时，PBLG之间紧密聚集于内，而PEG则舒展于外，自组装形成纳米级大小的球形纳米粒。在形成纳米粒的过程中，EGF在亲水介质和PBLG疏水微区之间发生分配，大部分包埋在纳米粒的核内，生成载有EGF的PEG-PBLG纳米粒。

(3)往步骤(2)所得溶液中加入EGF原液至溶液中的EGF达到最大容量为止，按0.02～0.04g海藻酸钠/mL溶液的比例往步骤(2)所得溶液中加入海藻酸钠，搅拌使其完全溶解，然后按0.04～0.1g乙二胺/mL溶液的比例往步骤(2)所得溶液中加入乙二胺，40℃下搅拌至完全溶解，2℃-6℃静止过夜，得到海藻酸钠水凝胶支架。

根据本实用新型的另外一个方面，本实用新型还提供了上述海藻酸钠水凝胶支架构建的组织工程皮肤的制备方法，包括以下步骤：

(1)将4～6g的BLG-NCA单体溶解于80～100mL的苯-二氧六环混合溶剂中，以ω-端氨基聚乙二醇为引发剂，室温反应60～72小时，将反应液倒入无水乙醇中沉淀，过滤，真空干燥得淡黄色半透明状固体，得PEG-PBLG嵌段共聚物，