[实用新型]一种定量检测试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型涉及生物化学及分子生物学领域，具体涉及一种定量检测试剂盒，适用于各种DNA的定量检测。

背景技术

在分子生物学领域进行DNA分析时常常需要对DNA进行准确定量。在临床诊断方面，病毒DNA的定量检测是临床诊断的重要依据。

SYBR Green I是一种结合于所有dsDNA双螺旋小沟区域的具有绿色激发波长的染料。在游离状态下，SYBR Green I发出微弱的荧光，但一旦与双链DNA结合后，荧光大大增强。因此，SYBR Green I的荧光信号强度与双链DNA的数量相关，可以根据荧光信号检测出PCR体系存在的双链DNA数量。SYBR Green I的最大吸收波长约为497nm，发射波长最大约为520nm。

SYBR Green I核酸凝胶染液是一种高敏感性的荧光染液，可用于检测琼脂糖凝胶及聚丙烯酰胺凝胶中的双链DNA和寡核苷酸。当染液与核酸结合后，SYBR Green I核酸凝胶染液的荧光信号会明显增强，因此经SYBR Green I核酸凝胶染液染色的凝胶显示出非常好的性价比，没有背景荧光。

目前，常规利用SYBR Green I荧光染料检测DNA含量的方法存在以下方面的不足：

1、PCR扩增过程中SYBR Green I荧光染料与DNA结合的方法存在非特异性扩增导致定量不准确的风险；

2、SYBR Green I荧光染料直接作用于样本存在对样本含量、检测仪器灵敏度要求高的问题，检测成本较高，而且样本中其他杂质也会对检测结果造成一定影响，导致定量不准确。

发明内容

针对以上现有技术问题，本实用新型的目的在于提供一种定量检测试剂盒，排出了样本中其他杂质和非特异性扩增产物对最终检测结果的影响，更准确、低成本的完成DNA含量的定量检测，包括以下步骤：粗滤；琼脂糖凝胶电泳；DNA回收；SYBR Green I荧光染色；检测及结果分析。该方法利用简化的DNA回收方法得到高纯度的DNA，再通过SYBR Green I染色和紫外分光光度计检测荧光，计算分析得到DNA浓度。具体技术方案如下：

一种定量检测试剂盒，包括盒体，支架，第一EP管以及第二EP管，其中，所述盒体内设置支架；所述支架上设有4-6个管架；所述第一EP管设置于第一管架上，所述第一EP管底部设有钻孔，管内设有定性滤纸；所述第二EP管设置于第二管架上，所述第二EP管底部设有钻孔，管内设有定性滤纸；所述第一EP管为0.5ml或1.5ml容量的EP管，所述第二EP管为0.5ml或1.5ml容量的EP管。

还包括盒盖，所述盒盖一侧连接至盒体并用于扣合盒体。

还包括第三EP管，第四EP管，第五EP管以及第六EP管，分别设置于支架的第三管架，第四管架，第五管架以及第六管架上。

上述定量检测DNA含量的SYBR Green I定量检测试剂盒的检测方法，包括如下步骤：

(1)粗滤；

(2)琼脂糖凝胶电泳；

(3)DNA回收；

(4)SYBR Green I荧光染色；

(5)检测；

(6)结果分析。

进一步地，步骤(1)中包括：(1-1)取待测样品放入已在底部钻好孔并放入小块定性滤纸的0.5ml的EP管中，再将这个0.5ml的EP管套入一个1.5ml的EP管中；(1-2)将套好的EP管离心，去掉0.5ml的EP管，并将1.5ml的EP管得到液体全部进行琼脂糖凝胶电泳。

进一步地，步骤(2)中包括：(2-1)配胶；(2-2)电泳准备；(2-3)上样；(2-4)电泳。

进一步地，步骤(3)中包括：(3-1)将切下来的含目的DNA的胶块切碎，放入已在底部钻好孔并放入小块定性滤纸的0.5ml的EP管中，再将这个0.5ml的EP管套入一个1.5ml的EP管中；(3-2)将套好的EP管离心，去掉0.5ml的EP管，并将1.5ml的EP管得到液体定容；(3-3)加入NaAc和无水乙醇，冷冻；沉淀干燥后溶于TE溶液。

进一步地，步骤(4)中包括：(4-1)加入与DNA复溶液等体积的稀释好的SYBR Green I工作液，混匀；(4-2)放置30分钟左右。

进一步地，步骤(5)中包括：(5-1)将染色好的DNA溶液放置到紫外分光光度计上，260nm波长处分别读取荧光值A260；(5-2)根据W_dsDNA＝A260×50μg/ml公式换算待测样品中目的DNA含量。