[实用新型]一种TPMT基因多态性检测试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型属于生物技术领域，涉及一种基因多态性检测试剂盒，具体涉及一种TPMT基因多态性检测试剂盒.

背景技术

嘌呤类药物是常用的肿瘤化疗药物之一，包括6-硫鸟嘌呤、6-巯基嘌呤和巯唑嘌呤。其药理学机制主要是在体内先经过酶的催化变成硫代嘌呤核苷酸后，阻止肌苷酸转变为腺核苷酸及鸟核苷酸，干扰嘌呤代谢，竞争性抑制RNA和DNA的合成，进而抑制细胞增殖。TPMT可使硫代嘌呤核苷酸发生甲基化，进而使其失去活性，从而使正常细胞免受过多活性代谢物的损害。因此TPMT在嘌呤类药物的解毒过程中有着重要作用。TPMT酶活性降低或缺乏与其等位基因多态性密切相关，表现为常染色体共显性遗传特征，TPMT基因G238C、G460A、A719G三个SNPs最为常见，且G238C、G460A、A719G三个SNPs发生突变后均会使TPMT酶活性显著降低或几乎没有活性。因此，研发一种快速简单有效的检测TPMT基因G238C、G460A、A719G三个SNPs位点基因型的试剂盒显得尤为重要。

实用新型内容

本实用新型提供一种采用荧光探针PCR技术，同时检测肿瘤化疗药物相关基因TPMT的G238C、G460A、A719G三个SNPs位点多态性的试剂盒，要解决的技术问题为目前市场上针对TPMT基因多态性检测成本高、耗时、特异性不强且操作复杂的问题，本实用新型能较好的应用于TPMT基因G238C、G460A、A719G三个位点单核苷酸多态性检测，体积小，操作简单，便于运输携带和使用。

本实用新型提供的一种TPMT基因多态性检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括盒体1、海绵衬垫2，所述的海绵衬垫2置于盒体1内，海绵衬垫2上设有多个容器孔并装有多个装有检测试剂的试剂管，分别为装有野生型阳性对照的试剂管3、装有突变型阳性对照的试剂管4、装有杂合子阳性对照的试剂管5、装有阴性对照的试剂管6、装有G238C位点基因多态性检测反应液的试剂管7、装有G460A位点基因多态性检测反应液的试剂管8、装有A719G位点基因多态性检测反应液的试剂管9。

进一步的，所述的容器孔较佳的为7个，容器孔在所述的海绵衬垫上分3排排列，上述的装有野生型阳性对照、突变型阳性对照、杂合子阳性对照、阴性对照的试剂管3、4、5、6均为1.5ml试剂管，装有G238C、G460A、A719G三个位点基因多态性检测反应液的试剂管7、8、9均为2ml试剂管。

上述的试剂管7、试剂管8、试剂管9中装有的基因多态性检测反应液主要成分包含：包括TaqDNA聚合酶、dUTPs、尿嘧啶-N-糖基化酶(UNG酶)、特异性引物和探针及MgCL₂。

上述的TaqDNA聚合酶为本领域常规TaqDNA聚合酶，生产厂商较佳的包括TAKARA或Promega，所述的特异性引物和探针优选的生产厂商为LIFE或TAKARA，所述的dNTPs、MgCL_2、尿嘧啶-N-糖基化酶(UNG酶)均为常规dUTPs、MgCL_2、尿嘧啶-N-糖基化酶(UNG酶)。

所述的阳性对照包括野生型阳性对照、突变型阳性对照、杂合子阳性对照，所述的野生型阳性对照为分别含有G238C、G460A、A719G三个位点的野生型纯合子基因序列及其多态性检测上游和下游引物及引物之间的线粒体DNA序列的质粒，突变型阳性对照为分别含有G238C、G460A、A719G三个位点的突变型纯合子基因及其多态性检测上游和下游引物及引物之间的线粒体DNA序列的质粒，杂合子阳性对照为等比例混合的野生型阳性对照质粒和突变型阳性对照质粒。

所述的G238C位点基因多态性检测引物包括：

上游引物，其序列为：5'-TCTTTGAAACCCTATGAACCTGAAT-3'。

下游引物，其序列为：5'-TTGTATCCCAAGTTCACTGATTTCC-3'。

所述的G460A位点基因多态性检测引物包括：

上游引物，其序列为：5'-ATGTTTTTTCTCTTTCTGGTAGGAC-3'。

下游引物，其序列为：5'-TTCCAAACATAATAACCTATTTCAA-3'。

所述的A719G位点基因多态性检测引物包括：

上游引物，其序列为：5'-ATCCCTGATGTCATTCTTCATAGTA-3'。

下游引物，其序列为：5'-CATCCATTACATTTTCAGGCTTTAG-3'。

所述的G238C位点基因多态性检测探针包括：