[实用新型]一种XRCC1基因多态性扩增检测试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型属于生物技术领域，涉及一种基因多态性扩增检测试剂盒，具体 涉及一种XRCC1基因多态性扩增检测试剂盒。

背景技术

近年来结直肠癌在我国的发病率迅速上升，居常见恶性肿瘤发病率的第5 位。流行病学证实肿瘤的发生与个体遗传背景及环境的交互作用密切相关，90％ 结肠癌的发生是由于遗传因素和环境因素交互作用的结果。DNA的损伤在肿瘤发 生过程中起到非常重要的作用，如不能成功修复会导致肿瘤的发生。XRCC1基因 为DNA修复基因，位于人19号染色体长臂区，编码的蛋白质通过与多聚ADP核 糖聚合酶(PAPR)、APE1、多聚核苷酸激酶/磷酸酶、DNA连接酶Ⅲ及DNA多聚 酶β的相互作用参与DNA损伤的修复，而R399Q位于其功能结构序列内 (BerwickM,VineisP.MarkersofDNArepairandsusceptibilitytocancer inhumans:anepidemiologicreview.JNatlCancerInst2000；92:874-897)。 有研究显示XRCC1R399Q基因多态性与结直肠癌具有遗传易感性的关系。因此在 结直肠癌的诊疗中对XRCC1基因R399Q位点多态性检测显得尤为重要(MonacoR, RosalR,DolanMA,PincusMR,Brandt-RaufPW.Conformationaleffectsofa commoncodon399polymorphismontheBRCT1domainoftheXRCC1protein. ProteinJ2007；26:541-546)。

实用新型内容

本实用新型要解决的技术问题为目前市场上针对XRCC1基因多态性扩增检 测特异性不强，成本高且操作复杂的问题，本实用新型能较好的应用于XRCC1 基因R399Q多态性检测，体积小，便于运输携带和使用。

为实现上述目的，本实用新型采用以下技术方案：

一种XRCC1基因多态性扩增检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括盒 体(1)、海绵衬垫(2)，所述的海绵衬垫(2)置于盒体(1)内，海绵衬垫(2) 上设有的容器孔装有多个装有试剂的离心管，分别为装有XRCC1基因多态性扩增 检测PCR反应液的离心管(3)、装有野生型阳性对照的离心管(4)、装有突变型 阳性对照的离心管(5)、装有杂合子阳性对照的离心管(6)、装有阴性对照的离 心管(7)。

所述的容器孔较佳的为5个，容器孔在所述的衬垫上分两排排列，上述的装 有XRCC1基因多态性扩增检测PCR反应液的离心管为2ml离心管，装有野生型阳 性对照、突变型阳性对照、杂合子阳性对照、阴性对照的离心管均为0.5ml离心 管。

上述的XRCC1基因多态性扩增检测PCR反应液包括DNA聚合酶、尿嘧啶-N- 糖基化酶(UNG酶)、特异性引物和探针及Mg2+，所述的探针为TaqManMGB探针 (美国AppliedBiosystems公司生产)。

优选地，所述的阳性对照包括野生型阳性对照、突变型阳性对照、杂合子阳 性对照，所述的野生型阳性对照为含野生型纯合子XRCC1序列的质粒，突变型阳 性对照为含突变型纯合子XRCC1序列的质粒，杂合子阳性对照为等比例混合的野 生型阳性对照和突变型阳性对照。

所述的XRCC1基因多态性检测引物包括：

上游引物，其序列为：5'-GCATTGCCCAGCACAGGATAAG-3'；

下游引物，其序列为：5'-GTCCAGCACCCACTCCTTACG-3'。

所述的XRCC1基因多态性检测探针包括：

野生型检测探针，其序列为：5'-GCCTTACCTCCGGGAGGGCA-3'，其5'端标记 物为VIC，3'标记物为MGB；

突变型检测探针，其序列为：5'-GCCTTACCTCTGGGAGGGCA-3'，其5'端标记 物为FAM，3'标记物为MGB；

所述的阳性对照为本领域常规的阳性对照，本实用新型优选的为含有XRCC1 基因DNA序列且包含多态性检测上游和下游检测引物及引物之间的基因组DNA 序列的质粒。

本实用新型的保存温度为-20℃，尽量减少反复冻融。

本实用新型较佳的应用方法为：