[发明专利]寨卡病毒多片段融合蛋白的制备及IgG/IgM抗体检测试剂盒

权利要求书

1.一种寨卡病毒多片段融合蛋白的制备及IgG/IgM抗体检测试剂盒，其特征在于应用生物信息学技术分析比较寨卡病毒与登革热病毒基因序列，选取寨卡病毒特有的线性表位进行多表位融合表达纯化，并优选出重组蛋白ZIKV-Ag2作为诊断抗原，用胶体金标记来检测样本中寨卡病毒；且试剂盒包括1)检测试剂卡、2)样品处理液和3)分隔并集中包装这些试剂瓶或管的包装盒。

2.一种寨卡病毒多片段融合蛋白的制备及IgG/IgM抗体检测试剂盒，其特征在于寨卡病毒多片段融合蛋白的制备过程包括以下步骤：

1)生物信息学比对：选取寨卡病毒与登革热病毒基因全长序列进行生物信息学比对分析，分析寨卡病毒特异的线性抗原表位；

2)特异基因片段的组合：筛选出寨卡病毒特异的线性抗原表位对应的基因片段序列1、2、3；并对片段1、2、3分别进行单独或组合，分别为①片段1；②片段2；③片段3；④片段1+片段2融合；⑤片段1+片段3融合；⑥片段2+片段3融合；⑦片段1+片段2+片段3融合；

4)基因片段的克隆表达与纯化：将7种基因片段组合各自进行PCR引物设计、扩增、构建重组质粒并诱导表达，经提取重组质粒并进行酶切、测序验证后大量诱导表达融合蛋白；

5)交叉配对实验：将4)中获得的融合蛋白标记金分别与抗人IgG单克隆抗体、抗人IgM单克隆抗体进行交叉配对实验，确定与单克隆抗体配的对灵敏度、特异度最高的融合蛋白，即为用于金标诊断的抗原；

6)制备胶体金试剂：利用5)中筛选出的抗原制备寨卡病毒IgG/IgM抗体胶体金检测试剂。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于该试剂盒中的检测试剂卡由1)样品垫、2)胶体金结合垫、3)层析膜、4)吸水材料和5)衬板组成，且上述1)～4)首尾互相衔接并附着在5)上；且所述胶体金结合垫为包被有金标记融合抗原ZIKV-Ag2以及金标记链霉亲和素的玻璃纤维膜；层析膜为包被有抗人IgG单克隆抗体A371、抗人IgM单克隆抗体A372、生物素-BSA的硝酸纤维素膜；衬板为PVC材质。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于该试剂盒中的样品处理液由1～50mg/mL的异嗜性抗体阻断剂和0.02％～0.06％NaN₃防腐剂组成。