[发明专利]一种提高猪体细胞核移植胚胎发育效率的方法

说明书

本发明公开了一种提高猪体细胞核移植胚胎发育效率的方法。本发明提供了毛壳素的应用，为如下(a1)‑(a5)中的至少一种：(a1)制备用于动物体细胞核移植的供核细胞培养液；(a2)制备用于动物体细胞核移植的重构胚胎培养液；(a3)培养用于动物体细胞核移植的供核细胞；(a4)培养用于动物体细胞核移植的重构胚胎；(a5)促进动物体细胞核移植中的重构胚形成囊胚。本发明通过利用小分子药物毛壳素对体细胞核移植中的供核细胞或者重构胚胎进行处理，促进体细胞核移植重编程的发生，显著提高克隆胚胎的囊胚发育率和囊胚细胞数，最终提高猪体细胞核移植技术的整体效率。本发明对提高猪体细胞核移植技术的整体效率有重要意义。

技术领域

本发明涉及胚胎发育以及动物生物技术领域，具体涉及一种提高猪体细胞核移植胚胎发育效率的方法。

背景技术

体细胞核移植技术诞生于1997年，最先在绵羊中获得成功。其主要方法是通过显微操作和细胞融合技术，将已经分化完全的供核细胞移入去核的卵母细胞中构成重构胚，激活重构胚后进行培养和移植，最后获得完整个体。因为获得的个体与供核细胞的基因型完全一致，所以该技术也称为体细胞克隆技术。因其独特的技术优势，体细胞克隆技术在动物育种、疾病模型构建、濒危动物保护、治疗性克隆以及药用蛋白生产等方面具有巨大的应用价值。自1997年第一只克隆羊“多莉”出生以来，体细胞克隆技术相继在猪、牛、狗、兔、猫等多种哺乳动物中获得成功。尽管经过二十年的发展，克隆技术已经相对成熟，有一套包括卵母细胞采集、培养、供核细胞分离、培养、卵的激活、胚胎体外培养和胚胎移植等整体技术，但是到目前为止，猪体细胞克隆的整体效率还很低，大约在1％左右。另外克隆猪常出现不健全的发育异常表现，如大舌头、肺部发育不全等。

发明内容

本发明的目的是提供一种提高猪体细胞核移植胚胎发育效率的方法。

本发明提供了毛壳素的应用，为如下(a1)-(a5)中的至少一种：

(a1)制备用于动物体细胞核移植的供核细胞培养液；

(a2)制备用于动物体细胞核移植的重构胚胎培养液；

(a3)培养用于动物体细胞核移植的供核细胞；

(a4)培养用于动物体细胞核移植的重构胚胎；

(a5)促进动物体细胞核移植中的重构胚形成囊胚。

本发明还保护一种用于动物体细胞核移植的供核细胞培养液，其中含有10nM毛壳素。

所述供核细胞培养液包括毛壳素和基础细胞培养液。

所述基础细胞培养液具体可为DMEM培养液。

所述供核细胞培养液还包括15％(体积百分比)胎牛血清。

所述供核细胞培养液还包括100U/mL氨苄青霉素和100U/mL硫酸链霉素。

本发明还保护一种用于动物体细胞核移植的重构胚胎培养液，其中含有0.5nM毛壳素。

所述重构胚胎培养液包括毛壳素和基础胚胎培养液。

所述基础胚胎培养液具体可为PZM-3培养液。

本发明还保护一种动物体细胞核移植的方法，包括如下步骤：用以上任一所述的供核细胞培养液培养供核细胞。

所述培养时间具体可为24h。

所述方法还包括取培养结束的供核细胞用于制备重构胚胎。

所述重构胚胎的制备方法具体可为：将一个经过所述方法培养得到的供核细胞注入至去核后的卵母细胞的卵周隙中，电击融合并激活重构胚胎。

本发明还保护一种动物体细胞核移植的方法，包括如下步骤：用以上任一所述的重构胚胎培养液培养重构胚胎。