[发明专利]同步检测黄曲霉毒素和甲萘威混合污染的时间分辨荧光免疫层析试剂盒、制备方法及应用

权利要求书

1.同步检测黄曲霉毒素、甲萘威混合污染的免疫层析时间分辨荧光免疫层析试剂盒，其特征在于：它包括免疫层析时间分辨荧光试纸条和含有铕标记的抗黄曲霉毒素单克隆抗体、铕标记的抗甲萘威单克隆抗体冻干品的样品反应瓶，其中：所述的免疫层析时间分辨荧光试纸条包括纸板，纸板的一面从上到下依次粘贴吸水垫、检测垫和样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接，所述检测垫以硝酸纤维素膜为基垫，硝酸纤维素膜上自上而下设置横向质控线和检测线，所述质控线包被有兔抗鼠多克隆抗体，所述检测线位于质控线下方，个数为2条，检测线上分别上包被黄曲霉毒素-牛血清白蛋白偶联物和甲萘威-卵清白蛋白偶联物；所述的抗甲萘威单克隆抗体为由保藏编号为CCTCC NO.C201654的杂交瘤细胞株Jnw1D2分泌产生的。

2.根据权利要求1所述的免疫层析时间分辨荧光免疫层析试剂盒，其特征在于：所述铕标记的抗甲萘威单克隆抗体是按照以下方法制备得到的：将抗甲萘威单克隆抗体和活化后的铕标记试剂在硼酸缓冲液中振摇反应2h以上，离心去上清，封闭得到目标产物；所述铕标记的抗黄曲霉毒素单克隆抗体是按照以下方法制备得到的：将抗黄曲霉毒素单克隆抗体和活化后的铕标记试剂在硼酸缓冲液中振摇反应2h以上，离心去上清，封闭得到目标产物。

3.根据权利要求2所述的免疫层析时间分辨荧光免疫层析试剂盒，其特征在于：铕标记试剂的活化方法为：取铕标记试剂，用硼酸缓冲液中超声分散，然后缓慢加入碳二亚胺溶液，振荡活化，离心去上清液，用硼酸缓冲液复溶，备用；活化时间为15-30min；所述封闭用的封闭液为含0.5-1％BSA的硼酸缓冲液。

4.根据权利要求1所述的免疫层析时间分辨荧光免疫层析试剂盒，其特征在于：所述铕标记试剂以有效量计与抗黄曲霉毒素单克隆抗体的质量比为1:(0.001-0.1)，铕标记试剂以有效量计与抗甲萘威单克隆抗体的质量比为1:(0.001-0.1)。

5.根据权利要求1所述的免疫层析时间分辨荧光免疫层析试剂盒，其特征在于：所述铕标记的抗黄曲霉毒素单克隆抗体冻干品是将铕标记的抗黄曲霉毒素单克隆抗体加入抗体保护液中冻干的；

所述铕标记的抗甲萘威单克隆抗体冻干品是将铕标记的抗甲萘威单克隆抗体加入抗体保护液中冻干的；

所述的抗体保护液为0.01％-0.30vt％的吐温-20、0.5-1.5wt％蔗糖和0.1-1wt％BSA水溶液。

6.根据权利要求1所述的免疫层析时间分辨荧光免疫层析试剂盒，其特征在于：所述免疫层析时间分辨荧光试纸条中的吸水垫长15-35mm，宽3-5mm；样品垫长12-18mm，宽2-5mm，相邻各垫的交叠长度为1-3mm；所述免疫层析时间分辨荧光试纸条中检测垫上靠近质控线的检测线与硝酸纤维素膜上沿的间距为6-15mm，每相邻两条检测线之间的间距为1.5-4.5mm，靠近质控线的检测线与质控线的间距为4-10mm；所述的样品反应瓶为1-5mL的卡口瓶。

7.根据权利要求1所述的免疫层析时间分辨荧光免疫层析试剂盒，其特征在于：所述免疫层析时间分辨荧光试纸条中检测垫上每厘米检测线所需的黄曲霉毒素-牛血清白蛋白偶联物的包被量为0.4～0.8μg，每厘米检测线所需的甲萘威-卵清白蛋白偶联物的包被量为0.8-1.0μg；所述样品反应瓶中铕标记的抗黄曲霉毒素单克隆抗体冻干品的含量为0.1-0.3μg，所述样品反应瓶中铕标记的抗甲萘威单克隆抗体冻干品的含量为0.2-0.4μg。