[发明专利]一种诱导肌腱组织再生的生物活性支架及其制备方法和用途

权利要求书

1.一种制备诱导肌腱组织再生的生物活性支架的方法，其特征在于：包括如下步骤：

（1）取新鲜肌腱，脱细胞处理，得脱细胞肌腱压片或切片支架；

（2）在上述支架上复合细胞外基质，即可；

步骤（2）中，复合细胞外基质的方法是：

①取肌腱细胞或者干细胞，接种于步骤（1）的脱细胞肌腱压片或切片支架上培养；

②待细胞生长至汇合度为100%的致密细胞片层，进行脱细胞处理；

步骤①中，所述干细胞是骨髓基质干细胞、脂肪干细胞、肌腱干细胞；

步骤②中，待细胞达到90%融合时，加入50μΜ Vc继续培养6-8 d至融合度为100%的致密细胞片层。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）所述脱细胞肌腱压片支架的制备方法如下：

1）取新鲜肌腱，清洗；

2）将肌腱沿厚度方向进行压缩，压缩率为60～90％；

3）对步骤2）压缩后的肌腱进行反复冻融；所述反复冻融是将步骤2）压缩后的肌腱置于液氮中1～3min，25～37℃放置3～10min，重复操作4～6次；

4）将步骤3）处理后的肌腱用核酸酶处理，清洗，即可；

其中，核酸酶处理的方法为：取步骤3）处理后的肌腱，置于DNase浓度为120～180IU/ml和RNase浓度为80～120μg/ml的核酸酶溶液中，室温或37℃恒温处理6～24h。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）所述脱细胞肌腱切片支架的制备方法如下：

1）取新鲜肌腱，清洗；

2）将肌腱进行反复冻融；所述反复冻融是将步骤1）清洗后的肌腱置于液氮中1～3min，25～37℃放置3～10min，重复操作4～6次；

3）对步骤2）冻融处理后的肌腱沿长度方向进行冰冻切片，切片厚度为300～900μm；

4）将步骤3）获得的肌腱切片用核酸酶处理，清洗，即可；

其中，核酸酶处理的方法为：取步骤3）得到的肌腱切片，置于DNase浓度为120～180IU/ml和RNase浓度为80～120μg/ml的核酸酶溶液中，室温或37℃恒温处理6～24h。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤②中，所述脱细胞处理是先用含20mM氨水的0.5% Triton X-100 37℃处理 15min，再用100 U/ml DNA酶37℃处理2h。

5.权利要求1~4任意一项所述方法制备的诱导肌腱组织再生的生物活性支架。

6.权利要求5所述的诱导肌腱组织再生的生物活性支架在制备治疗软组织缺损修复材料中的用途。

7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于：所述软组织缺损修复材料是肌腱组织或韧带组织缺损修复材料。