[发明专利]miR‑144‑3p在制备骨质疏松诊断标志物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及骨质疏松症的检测领域，更特别地，涉及miR-144-3p在制备骨质疏松诊断标志物中的应用，以及一种诊断骨质疏松的试剂盒。

背景技术

骨质疏松症(osteoporosis)是一种系统性骨病，其特征是骨量下降和骨的微细结构破坏，表现为骨的脆性增加，骨折的风险增加。随着我国老年人口的增加，骨质疏松症发病率处于上升趋势，在我国乃至全球都是一个值得关注的健康问题。目前临床主要依靠骨密度诊断骨质疏松，骨密度异常时，骨质疏松已经发生，寻找敏感外周血监测指标，可能对早期诊断提供帮助。

miR-144为一种本领域已知的miRNA小分子，其可能调控多种基因的表达。然而，目前miR-144的生物学功能尚不清楚，也尚未有人将其用于骨质疏松症的诊断中。

发明内容

发明人在研究过程中，发现miR-144-3p在骨质疏松患者的血清和骨组织中的表达都显著下调。基于该发现，本发明提供了miR-144-3p在制备骨质疏松诊断标志物中的应用，所述miR-144-3p的序列如SEQ ID NO:1所示。

本发明还提供了一种诊断骨质疏松的试剂盒，其包括检测miR-144-3p的引物以及荧光探针。

优选地，所述引物的序列如SEQ ID NO:2所示。

优选地，所述荧光探针为SYBR Green。

优选地，所述试剂盒还包括阴性对照。

优选地，所述阴性对照为从非骨质疏松者的血液样品中提取的cDNA。

优选地，所述试剂盒还包括阳性对照。

优选地，所述阳性对照为非骨质疏松者的血液样品中提取的cDNA。

通过本发明，可使用miR-144-3p作为骨质疏松诊断标志物，通过检测miR-144-3p在外周血或骨组织中的表达量，作为诊断检测对象是否患有骨质疏松的一个指标。当检测对象的miR-144-3p表达量显著低于非骨质疏松患者时，可诊断其患有骨质疏松，反正则诊断其未患骨质疏松。

附图说明

图1为非骨质疏松患者和骨质疏松患者的血液样品中10种miRNA表达水平统计图；

图2为非骨质疏松患者和骨质疏松患者的骨组织样品中10种miRNA表达水平统计图；

图3为非骨质疏松患者和骨质疏松患者的样品中RNAKL基因的mRNA水平统计图；

图4为为非骨质疏松患者和骨质疏松患者的血液样品中RNAKL蛋白的含量统计图；

图5为检测外周血单核细胞中的RNAKL蛋白的western blot照片；

图6为miRNA-144-3p模拟物、抑制物和阴性对照和空白对照中的TRAP基因的表达统计图；

图7为miRNA-144-3p模拟物、抑制物和阴性对照和空白对照中的CTSL基因的表达统计图；

图8为miRNA-144-3p模拟物、抑制物和阴性对照和空白对照中的NFATC基因的表达统计图。

具体实施方式

以下结合实例对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。

1.非骨质疏松患者与骨质疏松患者的血液和骨组织样品中的miR-144-3p表达差异

1)采集样品

分别从非骨质疏松志愿者和骨质疏松志愿者提取外周血样品和骨组织样品。

2)总RNA提取

外周血样品的总RNA提取：外周血样品直接用于提取总RNA，向外周血样品中直接加入3倍体积的trizol，室温静置5min，使血细胞充分裂解；加入200μl的氯仿静置5min；振荡摇勻，12000rpm离心15min，将上清液转移到一新的RNAse-free的EP管中，加入等体积预冷的异丙醇，充分摇匀，0℃下沉降；然后将管在4℃下离心15min，可观察到管底部和侧壁上有泪滴状沉淀物；去上清，加70％乙醇重悬沉淀，4℃离心，弃上清，室温下干燥，然后加DEFC水充分溶解，4℃储存待用。