[发明专利]一种通过多表位肽段组合的方式检测特异性抗体的方法

说明书

本发明公开了一种通过多表位肽段组合的方式检测特异性抗体的方法，属于生物技术、特异性抗体检测和疫苗制备领域。本发明的检测特异性抗体的方法，使用多表位肽段组合的方式代替全长肽段作为检测抗原检测样本中的特异性抗体。本发明解决了同一基因型的抗原肽段复杂多变或者抗原突变株增生，以及大片段多肽合成较困难的现状。本发明可避免对于包被抗原肽段选择的纠结性，减少大片段抗原肽段的合成，并提高检测结果的灵敏度。

技术领域

本发明涉及一种通过多表位肽段组合的方式检测特异性抗体的方法，属于生物技术、特异性抗体检测和疫苗制备领域。

背景技术

乙型肝炎是由乙型肝炎病毒感染所致。HBV颗粒由乙肝表面抗原(HBsAg)和来自宿主的脂质组成，是直径约为42nm的球形结构。HBsAg包括3种被膜糖蛋白，即大蛋白(LHBs)、中蛋白(MHBs)和小蛋白(SHBs)。乙肝病毒大分子蛋白表面又分为前S1区、前S2区和S区。有研究表明，PreS1只存在于表面抗原的大分子蛋白中，是乙肝早期诊断和病毒复制的指标，在病毒颗粒的装配和感染中起重要作用；目前最受关注的两个重要表位：第21-47号氨基酸所在的表位(简称P21表位)和第94-117号氨基酸所在的表位(简称P94表位)，存在病毒与肝细胞膜的结合位点。

根据HBV全基因组序列差别>8％将HBV分为A-I九个基因型，根据S基因的差别>4％可将HBV基因型分为20个亚型。目前，国际上已经存在不同基因型的参照序列以及以此为依据建立了多种基因型检测方法，但这些参照株多为单一患者来源，本身就存在多种碱基替代情况，且不同地区的相同基因型或亚型间还有较大差异，对于不同地区需建立相应适合的参照序列，这对于具体研究时所用的多肽序列选择造成了很大的困难。

目前，多肽主要通过化学合成和生物合成制备得到，其中多肽的化学合成有液相合成和固相合成之分，每种多肽合成方法应用方式不同且各有利弊。对于小片段多肽的合成(30个氨基酸以内，少数为50个氨基酸以内)多采用固相逐步合成方法，该方法精准和有针对性，但随着氨基酸数量的增加，合成效率逐步下降，非目的肽含量逐步增长，目的肽的纯度相应降低，后续的纯化和重复性愈加困难。对于大片段多肽(含100个以上氨基酸)目前大多应用液相分段合成法，原理是根据多肽片段在溶液中的专一性或化学选择性，自发连接成长肽，但步骤繁琐，不易合成，且精准度和针对性有待完善。

发明内容

为了解决同一基因型的抗原肽段复杂多变或者抗原突变株增生，以及大片段多肽合成较困难的现状，本发明提供一种检测特异性抗体的新方法。传统方法中，对于不同地区的不同患者，需选择对应的参照序列，并合成相应的多肽作为检测的包被抗原。本发明可避免对于包被抗原肽段选择的纠结性，减少大片段抗原肽段的合成，并提高检测结果的灵敏度。

本发明的第一个目的是提供了一种检测特异性抗体的方法，是使用多表位肽段组合的方式代替全长肽段作为检测抗原检测样本中的特异性抗体。

在本发明的一种实施方式中，所述方法，是采用两个以上表位的肽段，分别偶联大蛋白，然后以偶联有大蛋白的两个以上的肽段作为检测抗原。

在本发明的一种实施方式中，所述检测，可以是任意一种常规抗体检测手段，比如ELISA。

在本发明的一种实施方式中，所述特异性抗体是指乙肝病毒PreS1抗体、乙肝病毒PreS2抗体、甲肝病毒VP1抗体、甲肝病毒VP3抗体、丙肝病毒E2抗体等。

在本发明的一种实施方式中，所述表位，包括乙肝病毒PreS1抗体的P21表位、P94表位，PreS2抗体的120-145号氨基酸表位；甲肝VP1抗体的11-25号氨基酸表位、VP3抗体的102-121号氨基酸表位；丙肝病毒E2抗体的384-410号氨基酸表位、412-423号氨基酸表位、523-535号氨基酸表位等。

在本发明的一种实施方式中，所述肽段包括氨基酸序列为SEQ ID NO.1和SEQ IDNO.2的肽段。