[发明专利]制备蛋白质-聚氨基酸环状偶联物的方法

权利要求书

1.制备位点特异性蛋白质-聚氨基酸环状偶联物的方法，包括：(1)利用引发剂R₅XY引发N-羧基内酸酐和甘氨酸的N-羧基内酸酐聚合，得到C端具有苯基硫酯结构、N端具有聚甘氨酸嵌段结构的嵌段聚氨基酸，如下所示：

X表示硫或硒；

Y代表氢或三烷基硅基，其中三烷基硅基中的烷基为C₁-C₁₀烷基；

R₁每次出现时独立地表示天然氨基酸侧链或非天然氨基酸侧链；

R₅表示取代或未取代的C₁-C₁₀烷基或者取代或未取代的苯基，其中用于取代R₅的取代基选自羟基、氨基、巯基、羰基、羧基、磺酸基、羧酸盐、磺酸盐、酯基、酰胺和卤素；

n为选自10至200的整数；以及

m为选自1至10的整数，

(2)将所得到的嵌段聚氨基酸与N端半胱氨酸、C端具有LPXaTG序列的蛋白质混合，连续发生自然化学连接反应和转肽酶反应，实现蛋白质的环化，其中Xa为任一氨基酸。

2.根据权利要求1所述的方法，其中R₅XY为三甲基硅基苯硫酚或三甲基硅基苯硒酚。

3.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(1)在非质子性溶剂中且在室温下进行。

4.根据权利要求1所述的方法，其中对步骤(1)中所得的聚氨基酸进行后修饰，所述后修饰包括将所得的聚氨基酸与调节剂混合并在紫外灯照射下反应，所述调节剂为巯基乙胺盐酸盐或巯基丙酸。

5.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤(2)中，将步骤(1)得到的嵌段聚氨基酸与N端半胱氨酸、C端具有LPXaTG序列的蛋白质混合，所述嵌段聚氨基酸与所述蛋白质的氮端半胱氨酸发生连接反应，然后在转肽酶的作用下实现环化，如下所示：

其中LPXaTG序列是转肽酶的识别位点。

6.由权利要求1至5中任一项所述的方法制备的蛋白质-聚氨基酸环状偶联物。

7.权利要求6所述的蛋白质-聚氨基酸环状偶联物在制造蛋白质类药物中的用途。