[发明专利]赭曲霉毒素降解酶、编码基因、重组载体、细胞、添加剂及其应用

说明书

本发明涉及生物技术领域，具体涉及赭曲霉毒素降解酶、编码基因、重组载体、细胞、添加剂及其应用，更具体涉及赭曲霉毒素降解酶，该酶具有SEQ ID NO：2所示序列或其突变体，该酶的编码基因，含有该编码基因的载体和细胞，含有该酶和/或细胞和/或其发酵产物的添加剂，该酶酶、该编码基因、载体、细胞或添加剂在降解赭曲霉毒素和/或其他真菌毒素中的应用，以及降解赭曲霉毒素/或其他真菌毒素的方法。本发明有如下优点：环境友好，可高效短时地对赭曲霉毒素降解，且不产生任何有害副产物。所述酶可耐受高达80℃的高温催化，对pH值的要求也较低，稳定性好，还能够对伏马毒素和T2毒素一定程度的降解。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地，涉及一种赭曲霉毒素降解酶及其编码基因，含有该编码基因的重组载体和重组细胞，含有所述降解酶和/或所述重组细胞和/或其发酵产物的添加剂，所述降解酶、所述降解酶的编码基因、所述重组载体、所述重组细胞或所述添加剂在降解赭曲霉毒素和/或其他真菌毒素中的应用，以及一种降解赭曲霉毒素/或其他真菌毒素的方法。

背景技术

真菌毒素是产毒真菌在危害过程中产生的一类次生代谢物质，主要包括黄曲霉毒素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(又称呕吐毒素，DON)、玉米赤霉烯酮(ZEN)和伏马毒素(FUM)、赭曲霉毒素和T-2毒素等。而其中的赭曲霉毒素是继黄曲霉毒素后又一个引起世界广泛关注的霉菌毒素。它是一种重要的、污染食品的真菌毒素。

赭曲霉毒素是由赭曲霉(Aspergillusochraceus)和纯绿青霉(Penicilliumviridicatum)产生的一种霉菌肾毒素，可分为A和B两种类型，A的毒性较大。在4℃的低温下赭曲霉即可产生具有毒害作用浓度的赭曲霉毒素。动物摄入1ppm体重剂量的赭曲霉毒素A可在5-6天致死。常见的病变是肾小管上皮损伤和肠道淋巴腺体坏死。饲喂含1ppm浓度赭曲霉毒素的日粮3个月可引起动物烦渴、尿频、生长迟缓和饲料利用率降低；饲喂含量低至200ppb的日粮数周可检测到肾损伤。其他的临床症状还有腹泻、厌食和脱水。有时临床症状不明显，而在赭曲霉毒素中毒呈地方流行病的地区，动物在屠宰时惟一可观察到的病变是肾苍白、坚硬。

Marquardt等(1992)调查表明，饲料中OTA含量在0.3-16mg/kg时可引起畜禽中毒，使死亡率上升2％-58％。Madsen等(1982)报道，连续饲喂含OTA200μg/kg的饲料4个月，对猪的影响不大，而当OTA含量大于1400μg/kg时，显著降低猪的采食量和生长速度，饮水量增加。Huff等(1974)报道，连续饲喂含0.5-1.0mg/kg OTA的饲料3周，对肉仔鸡的增重无影响，而含0.5mg/kg OTA的饲料连续饲喂6周，可降低蛋鸡的产蛋性能和饲料转化率。

Hult等(1976)报道，瑞土规定猪和禽配合饲料中OTA的允许量分别不得超过200μg/kg和1000μg/kg。美国也正在制订有关条例。其他国家尚未见有关OTA的允许量规定。国内GB 2761-2011规定谷物、豆类及其制品中OTA的允许量不得超过5μg/kg。

目前对于真菌毒素的清除，目前国内外较为普遍的方法主要有物理去除及吸附、化学处理等。吸附剂在吸附毒素的同时还大量吸附了饲料和食品中的微量营养物质，被黏土吸附后的毒素，无法被分解，会引起二次污染。

生物降解可以高效将毒素转化为无毒产物、环保安全。已经成为当前真菌毒素削减技术中最有发展前景的处理技术途径，其不仅安全、环保、高效，而且利用现代生物技术开展研究非常符合当前我国节能减排的发展趋势。当前利用真菌毒素污染粮食作为原料发酵生产乙醇是最主要的手段之一，但毒素在发酵生产得到的大量副产物酒糟中被进一步浓缩，大大超过国家限量标准而不能利用。

而目前对于赭曲霉毒素的生物脱除的方法或者是去除效率较低，或者是降解时间长，或者是热稳定性以及酸碱稳定性较差，因此亟需开发出一种能够节能环保且高效降解赭曲霉毒素的方法。

发明内容