[发明专利]DNA免疫吸附剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及血液净化领域，具体涉及碳化树脂DNA免疫吸附剂的制备方法。

背景技术

系统性红斑狼疮(systemiclupuserythematosus,以下简称SLE)是一种常见的累及多系统多器官的自身免疫性疾病。由于患者机体免疫调节障碍及自身免疫耐受状态被打破，产生多种针对自身组织的抗体，导致组织和器官的损伤，这些抗体主要是抗Sm抗体、抗核抗体以及抗DNA抗体。其中抗DNA抗体可分为抗单链DNA抗体(抗ss-DNA抗体)和抗双链DNA抗体(抗ds-DNA抗体)。

根据国内外临床及基础研究表明，抗ds-DNA抗体的滴度与疾病严重程度及活动性呈正相关。最近几年，激素及免疫抑制剂的应用使SLE患者的愈后效果得到明显改善，但依旧存在很多患者药物疗效不显著的现象，过度的免疫抑制治疗所引起的感染是引起SLE患者死亡的主要原因。另外，多方面研究证实，抗双链DNA抗体(抗ds-DNA抗体)与DNA结合成为免疫复合物在肾小球基底膜沉积，或ds-DNA抗体直接作用于肾小球抗原，从而造成SLE患者的肾损伤。

使用DNA免疫吸附(IA)对患者进行血液灌流，是近二、三十年发展起来的新型疗法。Jones,Frank R(EP0272792A1,1987)对这种方法作了详细说明。DNA免疫吸附剂的吸附作用是依靠DNA对致病性抗ds-DNA抗体的特异识别作用，清除患者血液中的致病物质，缓解病情，改善患者的免疫功能，从而逐渐恢复健康。

美国的TermanDS等人(Lancet,1979,2(8147):824-7)首次使用活性炭为载体材料，采用火棉胶包膜固定DNA，得到DNA免疫吸附剂用于血液灌流治疗一名重度SLE患者，使患者生命延长，从此开辟了DNA吸附剂治疗SLE的先河。使用火棉胶包膜，使DNA免疫吸附剂的安全有效性得到了保证，但吸附率仅为50％左右。

发明内容

本发明要解决的技术问题是针对现有技术的缺陷，提供一种吸附性能更好的DNA免疫吸附剂。

为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案为：DNA免疫吸附剂，包括碳化树脂载体以及交联P(HEMA-b-GMA)膜层，DNA通过物理包埋作用以及与GMA的环氧基团发生开环反应而固载于碳化树脂表面。

P(HEMA-b-GMA)化学名称为聚(甲基丙烯酸羟乙酯-b-甲基丙烯酸缩水甘油酯)，交联P(HEMA-b-GMA)中的GMA可以和DNA分子发生开环反应将DNA化学固载在膜层上，可防止DNA脱落，提高吸附剂的吸附性能。

本发明要解决的另一技术问题是提供一种制备DNA免疫吸附剂的方法。

为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案为：DNA免疫吸附剂的制备方法，将碳化树脂载体与包膜溶液混合，然后搅拌、过滤、干燥、冷却，得到DNA免疫吸附剂；其中，包膜溶液与碳化树脂的体积比为(3-5)：1；包膜溶液中含有DNA和交联P(HEMA-b-GMA)。

包膜溶液中含有DNA和交联P(HEMA-b-GMA)。在包膜后的后处理过程中，DNA会与交联P(HEMA-b-GMA)侧链中的GMA发生开环反应，使DNA通过化学作用固载在膜层上，可防止DNA脱落，有效提高吸附剂的吸附性能。另外，P(HEMA-b-GMA)中的GMA与HEMA中的羟基可发生开环交联反应，从而降低P(HEMA-b-GMA)的溶解性能，增强膜的稳定性，进而增加DNA分子在膜层内部的物理包埋作用。优选的，包膜溶液中含有DNA的浓度为0.17-0.4mg/ml,P(HEMA-b-GMA)的质量浓度为0.4％-0.8％。

较好的方案为交联P(HEMA-b-GMA)中GMA的含量范围为1％-5％。当GMA在聚合物中的含量在1％-5％时，形成的P(HEMA-b-GMA)/DNA膜层溶胀性能不明显，部分DNA与GMA发生化学键合作用，DNA几乎没有脱落，吸附剂的吸附率均可达到75％以上，吸附性能好。

较好的方案为所述包膜溶液通过以下方法制得：将DNA原液与P(HEMA-b-GMA)乙醇溶液按1：(4-5)的体积比混合，然后搅拌或振荡至DNA完全溶解，得到所述包膜溶液，DNA原液中DNA的浓度为1-2mg/ml，P(HEMA-b-GMA)乙醇溶液中交联P(HEMA-b-GMA)的质量浓度为0.5％-1.0％。

还好的方案是干燥温度为70℃-85℃，干燥时间为1.5-3小时。