[发明专利]雌三醇均相酶免疫检测试剂、制备方法及检测方法

说明书

本发明公开了雌三醇均相酶免疫检测试剂、制备方法及检测方法，属于免疫检测试剂技术领域。本发明制备的雌三醇免疫原，免疫原性高，可以诱导得到高效价的抗雌三醇特异性抗体，并且与常见的62种药物无任何交叉反应；由该抗体制备得到的雌三醇检测试剂，可以精确快速地确定尿液、血液等生物样品中的雌三醇含量。与市场上现有的检测试剂、检测方法、制备方法比较，本发明检测试剂具有操作简便、灵敏度高、特异性强、结果准确等优点，还能有效降低雌三醇检测成本，有利于临床大规模推广使用。

技术领域

本发明属于免疫检测试剂领域，具体涉及一种雌三醇均相酶免疫检测试剂、制备方法及检测方法。

背景技术

雌三醇（Estriol，E3），其结构式如式（Ⅲ）所示：

式（Ⅲ）

雌三醇（Estriol，E3）是重要的内源性雌性激素之一。人体内存在游离雌三醇和结合雌三醇，通常男性及未孕妇女体内的雌三醇含量低于2.2 ng/mL，而妊娠期妇女体内的雌三醇含量一般高于31.6 ng/mL。在妊娠期检查时，可以通过检测孕妇血清或尿液中E3 的含量来判断胎儿的发育情况。正常孕龄女性体内雌三醇的主要来源是雌二醇和雌酮的代谢产物，因而在血清样品中的含量很低；孕妇体内雌三醇的主要来源是婴儿和胎盘，且含量一般较高(10 ng /mL)。孕妇血清中游离态雌三醇含量为临床上指示胎盘功能的重要参数。通过检测孕妇血清或尿液中雌三醇的含量，可以判断胎儿的发育状况。因此，快速、准确地检测血清或尿液中雌三醇的含量对于科学研究和临床诊断都具有重要意义。

目前，检测游离雌三醇或总雌三醇的常用方法有高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱-质谱法(LC-MS)、酶联免疫分析法(ELISA)、放射免疫法(RIA)、时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)和化学发光免疫分析法(CLIA)等，但是这些方法在临床大规模推广应用方面均具有一定的局限性。目前市场上缺乏稳定性好、灵敏度高、特异性强的雌三醇检测试剂，尤其是质量好的自动化检验试剂。因此，研发一种质量达到临床要求、实用性强、性价比高，可应用于全自动生化分析仪的雌三醇测定试剂盒已成为国内外体外诊断试剂行业的热点。均相酶免疫检测试剂可以实现在全自动生化分析仪上对雌三醇的高通量、快速化检测，且具有操作简便、灵敏度高、特异性强、结果准确等优点，能有效满足国内日益增长的临床检测需求。

发明内容

本发明为了克服现有技术存在的缺陷，采用独特的雌三醇制备免疫原性强的雌三醇免疫原及其抗体，用该抗体制备的雌三醇均相酶免疫检测试剂可以实现在全自动生化分析仪上对雌三醇高通量、快速化的检测。该检测试剂具有操作简便、灵敏度高、特异性强、结果准确等优点，还能有效降低雌三醇检测成本，有利于临床推广使用。

本发明的一个目的在于提供一种雌三醇均相酶免疫检测试剂，含有抗雌三醇特异性抗体和指示试剂，所述的指示试剂选自酶试剂、放射性同位素试剂、荧光试剂或发光试剂中的一种，优选为酶试剂；所述的酶试剂由雌三醇酶标偶联物和酶的底物组成，酶标偶联物为葡萄糖-6-磷酸脱氢酶-半抗原酶标偶联物，酶的底物为葡萄糖-6-磷酸；

所述的抗雌三醇特异性抗体由雌三醇免疫原免疫实验动物后产生的完整抗体分子，或者为保留与雌三醇特异性结合能力的抗体片段或抗体衍生物；

所述的雌三醇免疫原，其结构式如式（Ⅰ）所示：