[发明专利]检测鼻咽癌糖酵解相关基因分型的引物组及试剂盒

说明书

本发明涉及一种检测鼻咽癌糖酵解相关基因分型的引物组。所述引物组包括GCK rs2244164正向扩增引物与反向扩增引物、HK2 rs656489正向扩增引物与反向扩增引物及HIF1‑α rs10136168正向扩增引物与反向扩增引物。本发明还涉及一种检测鼻咽癌糖酵解相关基因分型的试剂盒。所述试剂盒包括含有扩增引物，PCR Buffer，MgCl₂，dNTP及Taq酶的PCR预混液。本发明的检测方法通过结合多重PCR技术、单碱基延伸技术和基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱分析技术进行基因分型检测，具有检测结果准确、特异性高、检测周期短、检测方法灵敏的优点。

技术领域

本发明涉及体外核酸检测技术领域，尤其涉及一种检测鼻咽癌糖酵解相关基因分型的引物组及试剂盒。

背景技术

鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma，NPC)是一种源于鼻咽上皮的高度侵袭性的恶性肿瘤。据统计，在2012年，鼻咽癌新发病例86,700人，死亡病例50,800人，因此其被认为是全球范围内较罕见的恶性肿瘤。但在流行区域，包括中国南方和东南亚，鼻咽癌的发病率可达到15-50/100000。鼻咽的解剖部位较深，周围临近许多重要的血管和神经，特殊的解剖位置及局部侵袭生长的生物学行为使得手术治疗难以实现；而大部分鼻咽癌的病理类型对放射线较敏感，目前鼻咽癌公认有效的治疗手段为放射治疗。早期的鼻咽癌患者采用单纯放射治疗有较为理想的效果，但由于鼻咽癌早期症状不明显，大部分患者在就诊时已是中晚期，肿瘤组织已向周围侵犯，甚至发生了远处转移，因此单纯放疗治疗鼻咽癌的总生存率并不理想。中晚期鼻咽癌患者由于较高的局部复发率和远处转移率导致总体生存率明显降低，为提高患者总生存率，化疗已经被应用于鼻咽癌的综合治疗之中。尽管目前NPC治疗取得了令人欣喜的进步，但由于鼻咽癌早期症状不明显及易于局部侵袭及远处转移的生长方式，使得很多患者就诊时已处于中晚期，此类患者治疗效果较早期患者差距明显。

因此，找到有效的用于NPC临床诊治的分子标志物，对于患者早诊早治，提高生存时间具有重要意义。

肿瘤细胞重编码代谢以促进增殖生长及长期生存。这一重编码的代谢过程的最主要特征是增加的葡萄糖摄取及发酵葡萄糖产生乳酸，即使在有足够的氧气及正常的线粒体功能情况下也会发生。这被称为Warburg效应。这一效应有可能是对恶性肿瘤早期发生发展过程中间接性缺氧的适应。增强的糖酵解会损失线粒体大量产能，但内环境的改变的同时也促使肿瘤细胞更加抵抗酸中毒、提供生物合成大分子的原料、及保护细胞免于氧化应激损害。

单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism,SNP)是在人群中具有一定的频率(1％)的变异，确切的讲，是基因组中由于单个碱基变异(包括插入、替换、缺失)造成DNA序列发生了改变，从而使得人类基因组更具有多样性。许多研究已经表明，诸多基因的SNP与包括肿瘤在内的多种疾病的发生发展、预后以及治疗敏感度密切相关，这提示SNP有潜力被应用到临床进行相关疾病的预防、筛查、诊断以及指导治疗，这对于个体化治疗及精准治疗具有非常重要的意义。

目前，已有诸多研究显示糖酵解通路基因SNP与多种肿瘤发生发展密切相关，但糖酵解通路基因改变与鼻咽癌风险相关至今尚未被研究过。基于此，以鼻咽癌的糖酵解通路关键基因为切入点，对糖酵解途径己糖激酶2(Hexokinase2，HK2)、乏氧诱导因子-1α(Hypoxia Inducible Factor-1α，HIF-1α)、葡萄糖激酶(Glucokinase,GCK),乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)4个关键基因的30个标签SNP进行检测，这对建立新的鼻咽癌风险筛查技术有重要意义，能够早期、灵敏和稳定的筛查鼻咽癌患病风险，以便进行及时、有效的监测评估及干预，降低医疗成本，节约社会资源。