[发明专利]一种具有保肝护肝功能的促肝细胞生长素制备方法

权利要求书

1.一种具有保肝护肝功能的低分子量猪胎肝促肝细胞生长素制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将健康乳猪肝筋膜去除，剪碎至1-1.5cm³；以猪胎肝∶生理盐水＝2∶3比例加入0.85％生理盐水，充分破碎、匀浆；

(2)将(1)于95℃热变性/10～90min；高速离心后，收集上清液，测蛋白浓度，加入总蛋白1/40～1/100的胰蛋白酶，pH7.0-pH8.2，37℃水解0.5～2h，离心收集上清液；

(3)以10kD超滤膜过滤，收集超滤液，75％终浓度丙酮沉淀，去离子水复溶后Sephadex G-50凝胶柱分离纯化，收集蛋白峰；

(4)真空冷冻干燥(3)，获得低分子量猪胎肝促肝细胞生长素。

2.根据权利要求1所述的低分子量猪胎肝促肝细胞生长素制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述的胰蛋白酶最佳使用比例为1/50，最佳水解时间为1h。

3.根据权利要求1所述的低分子量猪胎肝促肝细胞生长素制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述洗脱液应为去离子水。

4.据权利要求1所述的低分子量猪胎肝促肝细胞生长素，其特征在于，活性最佳的猪胎肝促肝细胞生长素分子量为8kDa。

5.根据权利要求4所述的促肝细胞生长素，其特征在于，其在不同浓度下可双向调节肝细胞生长，在1.5μg/mL～15μg/mL时可有效促进肝细胞的增殖，在浓度大于150μg/mL时，可抑制肝细胞的生长。