[发明专利]一种RNAi及其在制备肝癌治疗药物中的应用

说明书

本发明公开了一种针对MPPE1基因特定区段的RNAi序列，及含有该RNAi序列的载体、慢病毒和药物组合物，以及其在制备肝癌治疗药物中的应用。所述RNAi序列可以有效抑制MPPE1基因的表达。肝癌细胞中的MPPE1基因受本发明的RNAi序列干扰后，细胞生长周期G2期发生改变，细胞增殖力、迁移力、侵袭力显著降低，并出现了细胞凋亡，显示了其在制备肝癌治疗药物中的应用前景。

技术领域

本发明公开了一种RNAi序列，属于分子生物学技术领域。

背景技术

我国肝细胞癌(Hepatocellular Careinoma，HCC，简称肝癌)的发生率位居全球第一。据统计，全球每年肝癌发病人数约70万人,中国占1055％，死亡率占全球45％。由于我国肝癌患者就诊时多属中晚期，多数伴有肝硬化，手术切除率不足30％，术后复发率高达70％，化疗及放疗的疗效较差，并且现有靶向药物的有效率较低，当前尚无治疗肝癌的有效药物。研发抗肝癌药物是目前全球的研究热点。

MPPE1(Metallophosphoesterase1)是一个蛋白编码基因，其编码的蛋白是一种金属依赖性的磷酸酯酶，是钙调磷酸酶类似的磷酸酯酶超家族成员。MPPE1基因位于染色体18p11.2上，邻近GNAL基因，与该基因的3'端非编码区部分重叠。MPPE1cDNA长度1,926-bp，编码一种含有396个氨基酸残基的多肽，分子量大约在45.2kDa.。氨基酸残基包含了N端45aa残基的信号序列、240aa金属-磷酸酯域、C端24aa跨膜结构域。

MPPE1基因编码的蛋白属于金属磷酸酶。金属磷酸酶包括磷蛋白磷酸酶(phosphoprotein phosphatases，PPPs)、Mre11/SbcD类核酸外切酶、Dbr1类套索脱支酶、YfcE类磷酸二酯酶、紫色酸性磷酸酶(PAPs)、YbbF类UDP-2,3-diacylglucosamine水解酶、酸性鞘磷脂酶(ASMases)等。该类酶保守区段是一个双β-折叠和其C-末端双金属激活位点组成的三明治结构，这个区段可以结合金属离子协调蛋白功能。MPPE1蛋白包含了金属结合与激活位点，与人类的丝/苏氨酸磷蛋白磷酸酶催化亚基相似，例如：蛋白磷酸酶1(PP1)、蛋白磷酸酶2(PP2A)、以及钙调磷酸酶。

MPPE1(Post-GPI Attachment To Proteins Factor 5，PGAP5)参与GPI-APs从内质网向高尔基体的转运，糖基化磷脂酰肌醇锚定蛋白质(glycosylphosphatidylinositolanchored proteins,GP I-APs)是一类通过其羧基末端的糖基化磷脂酰肌醇(GP I)结构锚定于真核细胞膜表面的蛋白质。目前已经发现有150多种GP I–AP，其中与肿瘤关系密切的达50余种，GPI锚定的癌胚抗原、前列腺特异性抗原、胎盘型碱性磷酸酶等已经作为肿瘤标志物；GPI锚定的CD46、CD55和CD59等参与肿瘤免疫逃逸；GPI锚定的基质金属蛋白酶、T-钙黏着蛋白、CD87等参与肿瘤的侵袭和转移；GPI锚定的CD14、CD16、CD24、CD48和GDNFR-α等能以脂筏的形式介导肿瘤细胞的信息传递。一些细胞因子如IL-2、IL-12等被改造成GPI锚定蛋白质，已试用于肿瘤治疗。发现转运过程中PGAP5对于形成COPII运输GP I-APs至关重要，并且与p24家族中的p23蛋白形成复合物是一个重要的过程。因此MPPE1与肿瘤细胞的发生和增殖有着密切的相关性，控制MPPE1基因的表达能否有效控制肿瘤细胞，尤其是肝癌细胞的生长在肿瘤治疗领域成为一个热点研究领域，但是目前还没有发现如何通过控制MPPE1基因来有效控制肝癌细胞的有效途径，这也是肿瘤治疗领域一个亟待解决的技术问题。

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA(double-stranded RNA，dsRNA)诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。由于使用RNAi技术可以特异性剔除或关闭特定基因的表达，所以该技术已被广泛用于探索基因功能和传染性疾病及恶性肿瘤的基因治疗领域。