[发明专利]一种碱性果胶酶活性包涵体的制备及其应用有效
| 申请号： | 201611222644.0 | 申请日： | 2016-12-27 |
| 公开（公告）号： | CN106701724B | 公开（公告）日： | 2019-10-08 |
| 发明（设计）人： | 刘松;陈坚;堵国成;赵伟欣;黎青华 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N9/88 | 分类号： | C12N9/88;C12N15/60;C07K19/00;C12N1/21;C12N15/70;C12R1/19 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 彭素琴 |
| 地址： | 214122 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 碱性果胶酶 包涵体 制备 基因工程菌 突变体 应用 酶活 性质稳定 重复利用 酶工程 保温 生产 | ||
1.一种碱性果胶酶突变体，其特征在于，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.编码权利要求1所述突变体的基因。
3.一种获得权利要求1所述碱性果胶酶突变体的方法，其特征在于，将SEQ ID NO.3所示碱性果胶酶氨基酸序列中的自组装双亲短肽AEAEAKAKAEAEAKAK突变为AELEAKLKAELEAKLK。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述AELEAKLKAELEAKLK以PT-linker为连接肽与SEQ ID NO.3所示碱性果胶酶N端连接，获得氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的碱性果胶酶突变体。
5.一种基因工程菌，其特征在于，以大肠杆菌为宿主、pET-22b(+)为载体，表达权利要求1所述碱性果胶酶突变体。
6.权利要求5所述基因工程菌的构建方法，其特征在于，是将权利要求2所述的编码碱性果胶酶突变体的基因与载体连接，表达至大肠杆菌中。
7.一种生产碱性果胶酶包涵的方法，其特征在于，将权利要求5所述的基因工程菌接种至TB培养基中，30～37℃培养10～36h。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法是以按体积比3～5％的接种量进行接种。
9.根据权利要求7或8所述的方法，其特征在于，当菌体浓度OD600＝0.55～0.65时加入终浓度0.04～0.06mM IPTG进行诱导，28～30℃下诱导培养24～72h。
10.权利要求1所述碱性果胶酶突变体在食品、纺织、造纸领域的应用。
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