[发明专利]一种筛选耐盐碱性植物材料的双向电泳凝胶考马斯亮蓝染色和脱色方法

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，涉及一种利用考马斯亮蓝R250快速染色双向电泳凝胶以及脱色的方法。

背景技术

由于基因的功能主要通过其编码的蛋白质实现，利用蛋白质组学技术诠释基因功能被认为是后基因组研究中的最主要部分。目前，经典的蛋白质组学研究方法是制备蛋白样品，进行双向电泳，然后通过染色获得清晰的蛋白质图谱，再通过切较、酶切、质谱鉴定等技术，获得目标蛋白质。在此过程中，根据目的蛋白的性质，可利用不同的SDS凝胶适用的检测方法来检测双向凝胶，为了尽可能减少蛋白损失，提高检测的灵敏度，染色方法一直在被不断探索，综合考虑灵敏度、线性范围、方便程度、成本以及成像设备类型等条件基础上进行选择。目前常用的双向电泳染色方法为考马斯亮蓝染色、银染以及荧光染色。银染的灵敏度高，但容易产生很高的背景，造成蛋白分辨损失，且费时费力、费用高和需要更多地接触有毒化学物质。荧光染色虽然具有高灵敏度、背景低、与质谱匹配，但需要特别的扫描仪和荧光染料，所以存在染色成本较高的问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种筛选耐盐碱性植物材料的双向电泳凝胶考马斯亮蓝染色和脱色方法。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种筛选耐盐碱性植物材料的双向电泳凝胶考马斯亮蓝染色和脱色方法，包括如下步骤：

步骤一、染色液的配制：配制含有0.1～0.15wt％考马斯亮蓝R250、40～50vol％甲醇、10～20vol％乙酸、蒸馏水定容的染色液，混匀后静置0.5～1.5小时，过滤后室温保存备用。根据凝胶大小，调整染色液用量。

步骤二、脱色液的配制：配制含有20～30vol％乙醇、10～15vol％乙酸、蒸馏水定容的脱色液。

步骤三、染色：双向SDS凝胶蒸馏水冲洗2～3次，放入染色盒中，加入染色液，染色液没过凝胶即可；利用保鲜膜封口，室温条件下，摇床上染色2～3小时。

步骤四、脱色：倒出染色液，蒸馏水冲洗凝胶3～4次；加入脱色液，脱色液用量为染色液用量的1～2倍，室温条件下，摇床上脱色2～3小时，蒸馏水冲洗3～4次。

本发明具有如下优点：

1、该方法试用范围广，对于多数被子植物如盐芥、拟南芥、麻类作物以及孢子植物如卷柏等都具有较好的效果。

2、本发明在常规技术方法上进一步优化，省略掉前固定等程序，染色和脱色速度快、效果好。

3、此方法操作更为简单易行、成本低、凝胶背景清晰，具有较高的灵敏度。

附图说明

图1为染色效果图。

具体实施方式

下面结合附图对本发明的技术方案作进一步的说明，但并不局限于此，凡是对本发明技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，均应涵盖在本发明的保护范围中。

具体实施方式一：本实施方式提供了一种筛选耐盐碱性植物材料的双向电泳凝胶考马斯亮蓝染色和脱色方法，具体实施步骤如下：

步骤一、染色液的配制：配制含有0.1～0.15wt％考马斯亮蓝R250、40～50vol％甲醇、10～20vol％乙酸、蒸馏水定容的染色液，混匀后静置0.5～1.5小时，过滤后室温保存备用。根据凝胶大小，可调整染色液用量。

步骤二、脱色液的配制：配制含有20～30vol％乙醇、10～15vol％乙酸、蒸馏水定容的脱色液。

步骤三、染色：双向SDS凝胶蒸馏水冲洗2～3次，轻轻放入染色盒中，缓缓加入染色液，染色液没过凝胶即可；利用保鲜膜封口防止溶液挥发，室温条件下，摇床上缓慢摇动染色2～3小时。

步骤四、脱色：倒出染色液，蒸馏水冲洗凝胶3～4次；缓缓加入脱色液，脱色液用量为染色液用量的1～2倍即可，室温条件下，摇床上缓慢摇动脱色2～3小时，蒸馏水冲洗3～4次。

具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同的是，步骤一替换为：配制含有0.1～0.15wt％考马斯亮蓝R250、30～40vol％乙醇、10～15vol％乙酸、蒸馏水定容的染色液，混匀后静置0.5～1.5小时，过滤后室温保存备用。

具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一不同的是，步骤四替换为：倒出染色液，蒸馏水冲洗凝胶3～4次，缓缓加入脱色液，脱色液用量为染色液用量的1～2倍即可，室温条件下，摇床上缓慢摇动脱色1～2小时。蒸馏水冲洗3～4次后，根据凝胶脱色情况，加入含有5～8vol％乙醇、8～10vol％乙酸的脱色液，进行第二次脱色，摇床上缓慢摇动脱色1～2小时。