[发明专利]一种封闭群五指山小型猪遗传质量检测的方法

权利要求书

1.一种封闭群五指山小型猪遗传质量检测的方法，其特征在于，所述封闭群五指山小型猪遗传质量检测的方法包括以下步骤：

步骤一，五指山猪采集60份耳皮肤组织样，样本置于1.5mL消毒离心管中，带回实验室，-20℃冰箱保存备用；

步骤二，五指山猪基因组DNA按照天根DNA提取试剂盒中的方法提取，溶于TE中，-20℃保存；用琼脂糖凝胶电泳和NanoDrop2000双重检测DNA的纯度和浓度；

步骤三，33个微卫星标记引物进行多重PCR扩增；33个微卫星标记为OPEN、S0005、S0007、S0036、S0062、S0068、S0070、S0091、S0218、SW2、SW29、SW61、SW81、SW205、SW240、SW271、SW787、SW857、SW886、SW902、SW911、SW919、SW936、SW974、SW1066、SW1089、SW1092、SW1119、SW1374、SW2409、SWR158、SWR1008、SWR1120；

步骤四，将多重PCR产物进行基因扫描，使用Genemapper软件分析SSR数据，标定片段大小和基因型；

步骤五，运用Popgene32软件对数据进行统计分析将所有样本的每个微卫星位点的基因型以ab，bb形式输入Popgene32软件的数据文件；

所述五指山猪按照随机交配原则进行封闭繁育近20年，已繁育至3代以上。

2.如权利要求1所述的封闭群五指山小型猪遗传质量检测的方法，其特征在于，所述多重PCR扩增的PCR反应体系为20μ l，DNA模板1.0μ l、Taq Buffer 2.5μ l、dNTP 10mM 0.5μl、上游 引物0.5μ l、下游引物0.5μ l、TaqaDNA聚合酶0.5μ l，最后补H₂O至20μ l；反应条件为：95℃预变性3min，95℃变性30s,60℃退火30s,72℃延伸30s,进行10个循环；95℃变性30s，55℃退火30s,72℃延伸30s，进行20个循环；最后72℃修复延伸6min。

3.如权利要求1所述的封闭群五指山小型猪遗传质量检测的方法，其特征在于，所述步骤五中计算样品在各微卫星位点上的基因频率、平均观察等位基因数、平均有效等位基因数、香隆指数、平均有效杂合度；利用Cervus 3.0软件计算群体P值。