[发明专利]中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白含量检测试剂盒

说明书

一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白含量检测试剂盒，该试剂盒由试剂Ⅰ和试剂Ⅱ组成，试剂Ⅰ包括缓冲剂；试剂Ⅱ的组分包括包被中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白抗体的胶乳颗粒，所述试剂Ⅰ中还包括变性剂。蛋白质的聚集体状态通过添加变性剂使之产生某种程度的变性，暴露出物理和(或)化学结合部位，然后巯基解离剂断裂化学结合部位的化学结合作用，表面活性剂则分散物理结合部位的物理结合作用，使聚集体解聚；因此，合适的变性剂、巯基解离剂、表面活性剂的种类和浓度选择就尤为重要，既要解聚聚集体，又不能干扰随后的免疫学检测；而本发明的变性剂、巯基解离剂、表面活性剂的种类和浓度通过特定的筛选和确定，正好解决了上述技术问题。

技术领域

本发明涉及一种生物蛋白检测技术方案，特别是一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白含量检测试剂盒。

背景技术

人类中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophilgelatinase-associatedlipocalin，NGAL)分子量约为25kDa，共价结合于中性粒细胞明胶酶。NGAL生理状态下是一种生长因子，主要参与了早期肾脏上皮的发生、生长。在正常组织包括肾脏，肺，胃及结肠的上皮组织中表达量较低。肾脏缺血再灌注损伤后，近曲小管上皮大量表达NGAL，是近来发现的早期诊断AKI(急性肾损伤)的敏感的生物学标志物。尿NGAL是肾脏缺血再灌注损伤的一个敏感的指标，同时其表达量与肾脏缺血时间相关。

在寻找AKI早期诊断标记物的研究中，人们发现NGAL是一个很好的预测及诊断指标。有学者在急性缺血再灌注和顺铂诱导的AKI小鼠模型中，发现在损伤发生数小时之内即可检测到NGAL的表达明显增高。尿NGAL是缺血性肾损伤的一个早期、敏感的指标，即AKI时血、尿NGAL水平均升高，尿NGAL水平升高更为显著。并且NGAI升高较早期肾脏损伤的其他指标如肾脏损伤分子(kidneyinjurymolecular1，KIM一1)、Cyr61(cysteinrichprotein61)、132一微球蛋白等出现得要早。同时，NGAL水平与肾脏损伤程度呈正相关，血和尿NGAL可作为诊断AKI的早期、敏感、特异性的早期生物学标记物，并在一定程度上可以反映AKI严重程度及判断预后。NGAL已被证实作为小儿心脏搭桥手术后，预测急性肾损害的早期可靠指标。

NGAL也是反映肾脏慢性损害的一种有潜力的新标记物，在慢性肾脏病(chronickidneydis-ease，CKD)患者中，NGAL能确切反映肾脏损害的程度，是CKD进展的一个强力和独立的风险指标。

Suzuki等发现与血NGAL水平相比，尿NGAL是儿童SLE(系统性红斑狼疮)患者LN(狼疮性肾炎)活动度和肾损害的一个新的标记物，且LN病理分型不同其NGAL水平亦不同(依据WHO的LN分型，IV型患儿NGAL水平明显高于V型)。

在对抗中性粒细胞胞浆抗体(antineutrophilcytoplasmican-tibodies，ANCA)相关性血管炎的研究中，Chen等发现患者血清NGAL水平在疾病初期和复发期均较缓解期显著升高，提示循环NGAL水平可作为评价ANCA相关性血管炎疾病活动的一个有用指标。

目前NGAL的检测方法有酶联免疫法、放射免疫法、Western-blotting、化学发光法以及胶乳免疫比浊法。酶联免疫法自动化程度不高，且受人为因素影响较大；放射免疫法存在着环境污染问题；Western-blotting操作复杂，测定精密度低；而化学发光法灵敏度虽高，但测试程序复杂且检测成本较高，并且需要特定化学发光检测仪；胶乳免疫比浊法也是测定人血浆或尿液中NGAL浓度的常用方法，它与上述其他几种方法相比较，存在操作简单、灵敏度高、线性范围宽、无污染、应用范围广等显著的特点。因此，胶乳免疫比浊法有着极大的研究价值，但是目前市场上的胶乳免疫比浊法检测试剂盒存在着检测不到NGAL二聚体、NGAL/MMP-9复合物等问题，有待改进。