[发明专利]一种高粱体细胞悬浮培养方法及应用

权利要求书

1.一种高粱体细胞悬浮培养方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

步骤1，高粱种子的处理：

高粱种子先用70％乙醇浸泡1-3min，再用无菌水冲洗，然后用0.1g/100mL的HgCl₂水溶液浸泡10-20min，HgCl₂水溶液浸泡过程中加入2滴吐温-20，最后无菌水冲洗，得到无菌高粱种子；

步骤2，制备高粱愈伤组织，具体包括：

将无菌高粱种子接种于无菌苗培养基中，于25±1℃培养，每天光照12h；培养到高粱无菌苗苗长为3-5cm时取出，将距离叶基1.0cm以上的叶片切成宽度为1mm的叶段，并将叶段接种于诱导培养基中，在25±1℃下培养愈伤，自然光照，20-30天后挑选状态良好的愈伤组织进行继代培养，继代培养温度为25±1℃，自然光照，直至得到高粱颗粒状愈伤组织；

所述无菌苗培养基为：每升MS培养基中添加30g的蔗糖和8g的琼脂，pH为5.8；

所述继代培养的培养基与诱导培养基相同，均为：每升MS培养基中添加1mg的2,4-D、30g的蔗糖和8g的琼脂，pH为5.8；

步骤3，高粱体细胞悬浮系的建立：

选取步骤2中疏松、干燥、易碎、生长旺盛、颗粒状的高粱愈伤组织接种于液体培养基中，接种比例为2-3g:100mL，于100r/min、25±1℃、自然光下培养，每隔7天继代一次；每次继代时，将新、旧液体培养基以体积比为2：1的比例混合后作为继代培养的培养基，总共培养42-45天后获得高粱体细胞悬浮系；

所述液体培养基为：每升MS培养基中添加1mg的2,4-D和30g的蔗糖，pH为5.8。

2.根据权利要求1所述的高粱体细胞悬浮培养方法，其特征在于，步骤1中，高粱种子先用70％乙醇浸泡1min后，再用无菌水冲洗2-3次；HgCl₂水溶液浸泡15min后，用无菌水冲洗5-6次。

3.根据权利要求1所述的高粱体细胞悬浮培养方法，其特征在于，步骤2中，所述继代培养的次数为2-3次，每次间隔18-25天。

4.根据权利要求1所述的高粱体细胞悬浮培养方法，其特征在于，步骤3中，接种比例为2.5g:100mL。

5.一种如权利要求1所述的高粱体细胞悬浮培养方法在高粱育种中的应用。