[发明专利]伏马毒素检测胶体金速测卡和试剂盒以及对伏马毒素进行检测的方法

权利要求书

1.一种用于伏马毒素检测的胶体金速测卡，该胶体金速测卡包括依次排列在底板上的加样区、结合物区、观测区和吸水区；

其中，所述结合物区包括抗体金标垫，所述抗体金标垫上固定有胶体金颗粒和抗伏马毒素的单克隆抗体的偶联结合物；其中，所述胶体金颗粒的粒径为15-30nm，所述抗伏马毒素的单克隆抗体的效价大于10000；

胶体金颗粒的制备方法优选包括：

(i)在搅拌的条件下，向沸腾的氯金酸溶液中加入柠檬酸钠，使氯金酸与柠檬酸钠接触反应5-15min，得到反应产物；

(ii)将步骤(1)得到的反应产物在15-20℃/min降温速度下降温至20-35℃，得到粒径为10-30nm的胶体金颗粒；

其中，柠檬酸钠的加入量使得氯金酸与柠檬酸钠的重量比为1：3.3-3.8，所述氯金酸溶液为氯金酸的水溶液，在所述氯金酸溶液中，所述氯金酸的浓度为1-1.5重量％；

所述抗体金标垫的制备方法包括：

(1)将抗伏马毒素的单克隆抗体加入至pH 7.5-9的胶体金溶液中，接触40-80min，得到标记有所述单克隆抗体的胶体金溶液；

(2)向步骤(1)得到的标记有所述单克隆抗体的胶体金溶液中加入BSA溶液，接触40-80min；

(3)将步骤(2)得到的混合物料进行固液分离，将沉淀物复溶于含有蔗糖和/或海藻糖、BSA和叠氮钠的硼酸溶液中，得到金标抗体溶液；

(4)将步骤(3)所制备的金标抗体溶液喷涂于在含有吐温、BSA、蔗糖和/或海藻糖以及聚乙二醇的金标垫浸泡液中浸泡后且经干燥至含水量70-80重量％的金标垫上，之后干燥至含水量小于10重量％；

所述金标垫浸泡液中，吐温的浓度为0.005-0.05体积％，BSA的浓度为1-2重量％，所述蔗糖和/或海藻糖的浓度为3-7重量％，聚乙二醇的浓度为0.03-0.08重量％，用pH为8.5-9的PBS溶液定容；

其中，吐温为吐温80，聚乙二醇为聚乙二醇2000；

所述抗体金标垫的制备方法还包括：在涂覆所述金标抗体溶液前，将干燥的金标垫于相对湿度80-90％且2-6℃的条件下放置20-60min；

所述加样区包括能够吸收样品的样品垫；

所述样品垫为在含有BSA、蔗糖和/或海藻糖以及吐温的样品垫浸泡液中浸渍后并干燥的样品垫；

所述样品垫浸泡液为含有BSA、蔗糖和/或海藻糖、吐温以及胆酸的pH值为8.5-9.5的PBS溶液，其中，吐温的浓度为0.01-0.05体积％，BSA的浓度为1-5重量％，蔗糖和/或海藻糖的浓度为3-4重量％，胆酸的浓度为0.1-0.8体积％；

其中，吐温为吐温80；

所述观测区包括层析膜，所述层析膜上固定有检测线和质控线，其中，所述检测线包被有待检测的伏马毒素与BSA的偶联物，所述质控线包被有与抗伏马毒素的单克隆抗体特异性结合的二抗；

所述层析膜通过以下步骤进行制备：对所述伏马毒素与BSA的偶联物和所述二抗进行固定，然后干燥并组装；干燥前所述层析膜含水量为50-80重量％；干燥后所述层析膜含水量为小于10重量％。

2.根据权利要求1所述的胶体金速测卡，其中，所述样品垫与金标垫、金标垫与层析膜、层析膜与吸水区的相互重叠覆盖长度为1-1.5mm。

3.一种对伏马毒素进行检测的方法，所述方法包括：对待测样品进行前处理，得到伏马毒素提取物，并将所述伏马毒素提取物滴加至权利要求1或2所述的胶体金速测卡的样品垫中部，之后对所述伏马毒素提取物进行结果分析，其中，上样量为50-150μL。

4.根据权利要求3所述的方法，其中，

所述前处理包括：将待测样品与甲醇溶液接触5-30min，之后固液分离取上清液；

所述结果分析包括：(1)当液体达到观测区时，检测线和质控线均可见，判定为阴性；(2)静置5-15min后，质控线可见、检测线不可见，判定为阳性；(3)静置5-15min后，检测线与质控线均不可见或检测线可见而质控线不可见，判定检测无效。

5.一种检测伏马毒素用试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括权利要求1或2所述的胶体金速测卡、装有纯净水的小瓶和装有醇的小瓶。