[发明专利]抗HBV复制的靶向融合蛋白及其构建方法

说明书

本发明涉及抗HBV复制的靶向融合蛋白及其构建方法。利用乙型肝炎病毒核心蛋白HBc的C端区域（CTD）能与HBV cccDNA特异结合单的特性，将该肽段作为靶向cccDNA的引导分子，记为HBc144；合成A3A‑HBc144编码基因序列和HBc144‑UNG2的编码基因序列，并将这两段序列克隆到真核表达载体pVITRO2‑neo‑mcs的多克隆位点MCS1和MCS2上，构建成重组双表达载体Pvitro2‑A3A‑HBc/HBc‑UNG2，该重组载体在肝细胞中能同时表达两种融合蛋白，即A3A‑HBc144和HBc144‑UNG2本发明实现了A3A和UNG2对HBV cccDNA的靶向性，比单独表达A3A或A3A‑HBc的载体具有更强的抑制病毒复制的作用。

技术领域

本发明涉及一种靶向融合蛋白，具体涉及一种抗HBV复制的靶向融合蛋白及其构建方法。

背景技术

乙型肝炎病毒(HBV)感染是引起乙型肝炎、肝硬化和肝癌的主要病因。全世界HBV感染者约3.5亿，而中国就有约1.3亿，其中慢性乙型肝炎患者约3000万。慢性HBV感染难以根治，原因在于感染细胞的核内HBV cccDNA很难彻底清除，而HBV cccDNA是病毒复制的核心物质。因此寻找有效清除cccDNA的方法，是当今抗HBV研究的重要目标。

近年研究发现，干扰素α(IFNα)不仅能从HBV生命周期的多环节抑制病毒复制，更重要的是能诱发特异性cccDNA降解。但是该药容易产生耐受性和许多副作用,使治疗失败。IFN-α诱发特异性cccDNA降解的机制是：IFN-α可诱导肝细胞表达载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽APOBEC3A(A3A)，A3A可使cccDNA的dC脱氨基变成dU，进而尿嘧啶DNA糖基化酶2(UNG2)识别DNA中dU启动碱基切除修复，最终引起cccDNA特异性降解。而在肝细胞中A3A和UNG2均为低表达，且诱导表达的A3A主要位于细胞质中，因此要利用A3A和UNG2的上述作用机制，并且增强其诱导cccDNA降解作用，就应使肝细胞表达A3A和UNG2，并使他们能定位到核内与cccDNA特异结合，这样才可能提高降解cccDNA的作用。为此，我们通过构建具有靶向cccDNA的融合A3A和UNG2蛋白分子，获得更强的抗HBV复制效应。

发明内容

本发明的目的是提供一种抗HBV复制的靶向融合蛋白组合及其构建方法，实现A3A和UNG2对cccDNA的靶向性，以获得更强的抑制病毒复制的效应。

本发明所采用的技术方案为：

抗HBV复制的靶向融合蛋白，其特征在于：

包括A3A-HBc144融合蛋白和HBc144-UNG2融合蛋白；

A3A-HBc144中，A3A与HBc144由linker相连；

HBc144-UNG2中，HBc144与UNG2由linker相连。

A3A-HBc144融合蛋白中的A3A、Linker和HBc144氨基酸序列分别为：

A3A氨基酸序列:

MEASPASGPRHLMDPHIFTSNFNNGIGRHKTYLCYEVERLDNGTSVKMDQHRGFLHNQAKNLLCGFYGRHAELRFLDLVPSLQLDPAQIYRVTWFISWSPCFSWGCAGEVRAFLQENTHVRLRIFAARIYDYDPLYKEALQMLRDAGAQVSIMTYDEFKHCWDTFVDHQGCPFQPWDGLDEHSQALSGRLRAILQNQGN

Linker氨基酸序列:LEGGGGSGGGGS

HBc144氨基酸序列:

PETTVVRRRGRSPRRRTPSPRRRRSQSPRRRRSQSRESQC