[发明专利]一种凡纳滨对虾随机交配亲本追溯方法

说明书

本发明公开了一种凡纳滨对虾随机交配亲本追溯方法。本发明结合凡纳滨对虾产卵后精荚仍残留在雌虾体内的繁殖特点，加上目前较为成熟的对虾微卫星亲子鉴定方法，实现了凡纳滨对虾随机交配、事后进行亲本追溯鉴定的目的。本发明利用了凡纳滨对虾的生产过程雌虾成功交尾效率高的优点，克服了定向交尾雌雄不交配或交配后精荚位置不正确的不足，本发明方法的应用将加快凡纳滨对虾全同胞家系的制备，有助于推动对虾分子育种工作的进行。

技术领域

本发明属于遗传育种领域，具体涉及一种凡纳滨对虾随机交配亲本追溯方法。

背景技术

凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei,又称南美白对虾)养殖业在中国渔业经济中占有较大的比重，是我国水产养殖的支柱产业之一。然而，我国凡纳滨对虾的遗传育种工作却非常落后，优质的亲虾长期依靠进口，这种状况对我国对虾产业的健康、稳定及可持续发展带来了较大的隐患。因此，加强凡纳滨对虾遗传育种领域的基础与应用研究工作，将有助于改善我国凡纳滨对虾产业的不利局面。

制备大量亲本可追溯的全同胞家系是分子育种工作中不可缺少的环节。在鱼类的育种工作中，可以采用离体人工授精的方法进行，精子和卵子可以离体得到，父母本确定较容易，且有非常成熟的催产技术，因此得到大量的父母本可追溯的全同胞家系较容易实现。然而，凡纳滨对虾具有抱对追尾、交尾后即分开，雄虾精荚须打入雌虾纳精囊才能算真正完成交配，经常会出现多尾雄虾与雌虾先后交尾，只有1尾能够打入纳精囊的现象，人工定向交配又出现雄虾不交配，或者单尾交配但精荚打歪等不利因素。凡纳滨对虾繁殖过程中的不利因素大大限制了全同胞家系的制备进程，阻碍了对虾分子育种及优良亲本选育工作的进行。

发明内容：

本发明的目的是为解决定向交配制备家系过程中的不足，建立一种凡纳滨对虾随机交配亲本追溯方法。

本发明的凡纳滨对虾随机交配亲本追溯方法，其特征在于，包括以下步骤：

a、雄虾DNA库制备：繁殖期性成熟后的凡纳滨对虾亲虾分开饲养，雄虾在雄虾池中饲养，雌虾在雌虾池中饲养，将雄虾池中的所有雄虾最后一对游泳足剪下，然后分别提取游泳足的DNA，组成雄虾DNA库；

b、亲虾随机交配：在上午7-11时，挑选性腺饱满延伸到尾部的雌虾放入雄虾池中，雄虾与雌虾自由交配；

c、雌虾产卵：在当天18-21时，将雌虾捞出，检查纳精囊是否打入精荚，得到正确打入精荚的雌虾，每个正确打入精荚的雌虾放入单独的水体中产卵；

d、取精荚：查看雌虾在单独水体中是否产卵，发现产卵后立即将雌虾纳精囊中的精荚取下并剪下产卵雌虾的游泳足；

e、亲本追溯：提取产卵雌虾的游泳足DNA，即得到母本基因组DNA；提取精荚中残留的白色粘稠精子团的DNA，利用多态性丰富、扩增产物稳定的对虾微卫星引物进行PCR扩增，并与雄虾DNA库中的结果进行匹配鉴定，匹配上的雄虾DNA即为父本基因组DNA，由此确定父本。

本发明的有益效果是：本发明结合凡纳滨对虾产卵后精荚仍残留在雌虾体内的繁殖特点，加上目前较为成熟的对虾微卫星亲子鉴定方法，实现了凡纳滨对虾随机交配、事后进行亲本追溯鉴定的目的。本发明利用了凡纳滨对虾的生产过程雌虾成功交尾效率高的优点，克服了定向交尾雌雄不交配或交配后精荚位置不正确的不足，本发明方法的应用将加快凡纳滨对虾全同胞家系的制备，有助于推动对虾分子育种工作的进行。

具体实施方式：

以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。

实施例1：

1、雄虾DNA库制备：繁殖期性成熟后的凡纳滨对虾分开饲养，雄虾在雄虾池中饲养，雌虾在雌虾池中饲养，将雄虾池中的所有80尾雄虾最后一对游泳足剪下，于体积分数95％酒精-20℃保存，然后分别提取游泳足的DNA，单独编号(雄1，2，3……80)，组成雄虾DNA库；