[发明专利]一种通过体胚发生大量繁殖忽地笑的方法

权利要求书

1.一种通过体胚发生大量繁殖忽地笑的方法，其特征在于：

A 外植体消毒：选取在-4℃，保存30天以上的忽地笑小鳞茎，剥去外层鳞片，切除根部，经消毒试剂消毒后，无菌水冲洗4-5遍，最后用无菌滤纸吸干表面水分；

B 丛生芽诱导和小鳞茎培养：将消毒好的忽地笑切去上部1/2，将带有鳞茎盘的鳞茎均匀分为4-8块，接种到以下培养基中：MS基本培养基，植物生长激素6-苄 基腺嘌呤（6-BA）3.0~5.0mg/L，吲哚乙酸（IBA）0.1~0.5mg/L蔗糖20~40g/L，适当pH值；培养温度28±1℃，光照强度1000~3000lx，光照时间10~16h，进行光照培养，之后将诱导出的不定芽分别接种到相同培养基上，继续培养20~30天；

C 愈伤组织诱导：将分化而成的丛生芽切开，去除原有鳞片和褐化部分，接种到以下培养基中：MS基本培养基，蔗糖20~40g/L，植物生长激素毒莠定（Picolarm）1.0~3.0mg/L，6-苄基腺嘌呤（6-BA）0.1~0.5mg/L，适当pH值；培养温度28±1℃；

D愈伤组织增殖：将诱导出20天左右的愈伤组织切下，接种到以下培养基上：MS基本培养基，植物生长激素毒莠定（Picolarm）1.0~2.0mg/L，6-苄 基腺嘌呤（6-BA）1.0~2.0mg/L，培养温度28±1℃，光照时间10~16h，进行光照培养30~40天；

E 愈伤组织的分化：将进行增殖培养后的愈伤组织切成2cm左右的小块，接种到以下培养基上：MS基本培养基，植物生长激素6-苄 基腺嘌呤（6-BA）4.0~6.0mg/L，萘乙酸（NAA）0.1~0.5mg/L，培养温度25±1℃，光照时间10~16h，进行光照培养30~40天；

F 生根培养：选取生长健壮的试管苗，连同小鳞茎接种到如下培养基中：1/2MS或MS基本培养基，蔗糖60~90g/L，植物生长激素萘乙酸（NAA）400~500mg/L，适当PH值，进行光照培养50~60天。

H 炼苗移栽：将组培瓶盖打开，并添加少量的蒸馏水，进行有菌条件驯化；用镊子将组培苗从瓶中取出，移栽到已经灭菌的栽培基质中，进行遮阴驯化3周，期间不定期的喷施1/2MS营养液。