[发明专利]用于鉴定三种药用蛇的引物组合及其应用有效

申请号：	201611190219.8	申请日：	2016-12-20
公开（公告）号：	CN106636397B	公开（公告）日：	2019-12-20
发明（设计）人：	袁媛;蒋超;黄璐琦;赵玉洋	申请（专利权）人：	中国中医科学院中药研究所
主分类号：	C12Q1/6888	分类号：	C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11
代理公司：	11245 北京纪凯知识产权代理有限公司	代理人：	关畅;何叶喧
地址：	100700 北***	国省代码：	北京;11
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摘要：
搜索关键词：	金钱白花蛇乌梢蛇蕲蛇引物组合鉴别单次PCR反应单链DNA分子混合样品凝胶电泳可检测条带应用物种
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【权利要求书】：

1.引物组合，由引物对Ⅰ、引物对Ⅱ和引物对Ⅲ组成；

所述引物对Ⅰ由引物F1和引物F2组成；

所述引物F1为序列表的序列1所示的单链DNA分子；

所述引物F2为序列表的序列2所示的单链DNA分子；

所述引物对Ⅱ由引物F3和引物F4组成；

所述引物F3为序列表的序列3所示的单链DNA分子；

所述引物F4为序列表的序列4所示的单链DNA分子；

所述引物对Ⅲ由引物F5和引物F6组成；

所述引物F5为序列表的序列5所示的单链DNA分子；

所述引物F6为序列表的序列6所示的单链DNA分子。

2.权利要求1所述引物组合的应用，为如下（b1）至（b6）中的任意一种：

（b1）鉴别蕲蛇、乌梢蛇和金钱白花蛇；

（b2）制备用于鉴别蕲蛇、乌梢蛇和金钱白花蛇的试剂盒；

（b3）鉴定待测蛇是否为蕲蛇、乌梢蛇或金钱白花蛇；

（b4）制备用于鉴定待测蛇是否为蕲蛇、乌梢蛇或金钱白花蛇的试剂盒；

（b5）鉴定待测样品中是否含有蕲蛇和/或乌梢蛇和/或金钱白花蛇；

（b6）制备用于鉴定待测样品中是否含有蕲蛇和/或乌梢蛇和/或金钱白花蛇的试剂盒。

3.含有权利要求1所述引物组合的试剂盒；所述试剂盒的用途为如下（c1）或（c2）或（c3）：

（c1）鉴别蕲蛇、乌梢蛇和金钱白花蛇；

（c2）鉴定待测蛇是否为蕲蛇、乌梢蛇或金钱白花蛇；

（c3）鉴定待测样品中是否含有蕲蛇和/或乌梢蛇和/或金钱白花蛇。

4.权利要求3所述试剂盒的制备方法，包括将各条引物单独包装的步骤。

5.鉴别蕲蛇、乌梢蛇和金钱白花蛇的方法，为如下方法Ⅰ或方法Ⅱ；

所述方法Ⅰ包括如下步骤：提取待测蛇基因组DNA；以所述基因组DNA为模板，采用权利要求1所述的引物组合进行PCR扩增，如果扩增产物中含有349bp的DNA片段、待测蛇为蕲蛇，如果扩增产物中含有124bp的DNA片段、待测蛇为乌梢蛇，如果扩增产物中含有565bp的DNA片段、待测蛇为金钱白花蛇；

所述方法Ⅱ包括如下步骤：检测待测蛇的基因组DNA中是否含有权利要求1所述的引物组合中的引物对Ⅰ的靶序列、引物对Ⅱ的靶序列或引物对Ⅲ的靶序列；如果所述基因组DNA中含有引物对Ⅰ的靶序列、待测蛇为蕲蛇，如果所述基因组DNA中含有引物对Ⅱ的靶序列、待测蛇为乌梢蛇，如果所述基因组DNA中含有引物对Ⅲ的靶序列、待测蛇为金钱白花蛇；

所述引物对Ⅰ由引物F1和引物F2组成；

所述引物F1为序列表的序列1所示的单链DNA分子；

所述引物F2为序列表的序列2所示的单链DNA分子；

所述引物对Ⅱ由引物F3和引物F4组成；

所述引物F3为序列表的序列3所示的单链DNA分子；

所述引物F4为序列表的序列4所示的单链DNA分子；

所述引物对Ⅲ由引物F5和引物F6组成；

所述引物F5为序列表的序列5所示的单链DNA分子；

所述引物F6为序列表的序列6所示的单链DNA分子；

所述引物对Ⅰ的靶序列为序列表的序列7所示的单链DNA分子；

所述引物对Ⅱ的靶序列为序列表的序列8所示的单链DNA分子；

所述引物对Ⅲ的靶序列为序列表的序列9所示的单链DNA分子。