[发明专利]一种快速确诊猫白血病的检测方法及其试纸条的制备

权利要求书

1.一种荧光微球标记的抗体的制备方法，包括以下步骤：

(1)将定量的荧光乳胶微球溶液加到缓冲溶液中稀释，超声1.5min，得到荧光微球分散液。

(2)向步骤(1)中的荧光乳胶微球分散液中迅速滴入活化剂，快速置于涡旋振荡器上低速震荡1min后，固定在涡旋振荡器上，室温下震荡活化30min。

(3)活化结束后，将步骤(2)中的荧光乳胶微球分散液在26℃，14000rpm下，离心12min后移去上清液，用步骤(1)中的缓冲溶液清洗，再次以相同条件离心后，弃去上清液，用步骤(4)中缓冲溶液复溶重悬。

(4)取FeLv单克隆抗体，加入缓冲溶液稀释至0.06mg/mL。

(5)将步骤(3)中复溶的纳米颗粒分散液加入到步骤(4)中的抗体稀释液中，立刻在涡旋震荡器上震荡1.5min，随后超声1.5min，然后固定在涡旋振荡器上在室温下震荡反应1h。

(6)反应结束后，将步骤(5)中溶液超声1min，在26℃，14000rpm下，离心12min后移去上清液，加入封闭液，同样然后固定在涡旋振荡器上在室温下震荡反应1h。

(7)将步骤(6)中溶液离心后再次加入封闭液清洗，在26℃，14000rpm下，离心12min后移去上清液，可得到荧光微球标记的抗体。

2.根据权利要求1所述的一种荧光微球标记的抗体的制备方法，其特征在于：步骤(1)的缓冲溶液是2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲溶液，其pH为7.2。

3.根据权利要求1一种荧光微球标记的抗体的制备方法，其特征在于：步骤(2)中活化剂是EDC&NHS活化剂。

4.根据权利要求1所述的一种荧光微球标记的抗体的制备方法，其特征在于：步骤(3)中复溶的缓冲溶液以及步骤(4)的缓冲溶液均是硼酸酸缓冲溶液，其pH值为7.8。

5.根据权利要求1所述的一种荧光微球标记的抗体的制备方法，其特征在于：荧光微球可以是一种金属胶体颗粒、一种磁颗粒，包括但不仅限于乳胶纳米颗粒。

6.一种使用权利要求1～5任何一项所述制备方法制备种荧光微球标记的抗体制备的试纸条其特征在于，试剂盒的结构如图1所示：在塑料底板(1)一端粘贴样品垫(2)，样品垫的一端紧密压接喷涂有荧光微球标记的毛白血病病毒抗体的结合垫(3)，结合垫(3)一端紧密压接硝酸纤维素NC膜(4)，NC膜上包被有检测线T1(5)和质控线C(6)，NC膜的另一端连接吸水垫(7)形成试纸，试纸装入塑料卡壳内形成试纸卡。

7.一种使用权利要求1～6任何一项所述制备方法制备的荧光微球标记的抗体制备的试纸条，包括以下步骤：

(1)(1)抗体标记的荧光微球中加入重悬液，反复吹打，随后超声5min直至沉淀完全溶解。

(2)将步骤(1)中的抗体标记的荧光微球溶液用划膜喷金机喷涂于结合垫，随后在烘箱中37℃下烘干1h。

(3)将对照线和检测线要包被的抗体，分别用适宜的稀释液稀释后，用划膜喷金机将其分别喷涂于硝酸纤维素膜上，37℃下在烘箱中烘干1h。

(4)组装粘贴结合垫、样品垫，密封过夜，使之充分粘合。

8.根据权利要求7所述的荧光微球标记的抗体制备的试纸条，其特征在于：步骤(2)中标记抗体荧光微球溶液的溶度为1.5mg/mL，涂覆量为5μL/cm。

9.根据权利要求6所述的荧光微球标记的抗体制备的试纸条，其特征在于：步骤(3)中硝酸纤维素膜的对照线包被的抗体为抗鼠lgG多克隆抗体，涂覆量为0.9μL/cm；检测线包被的抗体为FeLv单克隆抗体，涂覆量为0.9μL/cm。

10.如权利要求1～5任一项所述的制备方法制备的荧光微球标记的抗体在猫白血病病毒检测中的应用。

11.如权利要求6～9任一项所述的试纸条在猫白血病病毒检测中的应用。