[发明专利]一种分离和/或检测L-卡谷氨酸光学异构体的方法

说明书

本申请公开了一种分离L‑卡谷氨酸，和/或检测L‑卡谷氨酸纯度的方法，特别是使用高效液相色谱法分离和/或检测L‑卡谷氨酸。包括如下步骤：1)选用的色谱柱为硅胶类手性柱，流动相为反相溶剂；2)设置所述流动相的速度为0.8ml/min至1.1ml/min，检测波长为249nm至259nm；3)向高效液相色谱仪注入样品，在所述L‑卡谷氨酸在色谱图上出峰时，收集所述L‑卡谷氨酸；和/或根据色谱图上的出峰情况确定所述L‑卡谷氨酸的纯度。

技术领域

本申请涉及一种分离L-卡谷氨酸，和/或检测L-卡谷氨酸纯度的方法，特别是使用高效液相色谱法分离和/或检测L-卡谷氨酸。

背景技术

卡谷氨酸为一种抗高氨血症类药物，其分子式为C₆H₁₀N₂O₅，化学名为N-氨基甲酰-L-谷氨酸或(2S)-2-(氨甲酰氨基)戊二酸，结构式为

该分子中含有1个手性中心，只有一个光学异构体，即为D-卡谷氨酸，该杂质可通过后续反应，残留在氨基类药物中，影响药品质量。因此，对于L-卡谷氨酸的光学异构体杂质，在药物合成过程当中是需要进行质量控制的。控制L-卡谷氨酸中光学异构体的含量，对提高氨基酸类药物的质量、保证广大患者用药的安全性具有重大意义。

然而，含手性碳原子的光学异构体的分离一直是手性药物合成和制剂过程中质量控制的难点。

发明内容

本申请根据现有技术中存在的技术问题，提供了一种分离L-卡谷氨酸，和/或检测L-卡谷氨酸纯度和/或含量的方法，所述方法为高效液相色谱法，包括如下步骤：1)选用的色谱柱为硅胶类手性柱，流动相为反相溶剂；2)设置所述流动相的速度为0.8ml/min至1.1ml/min，检测波长为249nm至259nm；3)向高效液相色谱仪注入样品，在所述L-卡谷氨酸在色谱图上出峰时，收集所述L-卡谷氨酸。通过本方法的建立，可以有效的分离L-卡谷氨酸和/或D-卡谷氨酸，和/或检测L-卡谷氨酸的纯度和/或含量和D-卡谷氨酸的纯度。

在一个具体实施方式中，所述硅胶类手性柱为CRS10W色谱柱；所述反相溶剂1mM至3mM的硫酸铜溶液与甲醇的混合液。

在一个具体实施方式中，所述硫酸铜溶液的浓度为2mM。

在一个具体实施方式中，所述硫酸铜溶液和甲醇的体积比例为96:4至99:1。

在一个具体实施方式中，所述硫酸铜溶液和甲醇的体积比例为97:3至98:2。例如2mM硫酸铜溶液和甲醇的体积比例为97:3。

在一个具体实施方式中，所述流动相的速度为0.9ml/min至1.0ml/min，例如所述流动相的速度为1.0ml/min。

在一个具体实施方式中，所述样品中的L-卡谷氨酸的浓度为2mg/ml至3mg/ml。

在一个具体实施方式中，所述样品中的L-卡谷氨酸的浓度为2mg/ml至2.5mg/ml

在一个具体实施方式中，所述检测波长为252nm至256nm，例如最优的检测波长为254nm。

在一个具体实施方式中，所述色谱柱的柱温为20℃至35℃。例如，柱温为20℃、21℃、22℃、23℃、24℃、25℃、26℃、27℃、28℃、29℃、30℃、31℃、32℃、33℃、34℃、35℃。

在一个具体实施方式中，述色谱柱的柱温为25℃至30℃。

在一个具体实施方式中，所述方法还包括提供L-卡谷氨酸溶液作为阳性对照。

附图说明

图1显示了实施例1的HPLC图。其中，图中1号峰为异构体D-卡谷氨酸，2号峰为L-卡谷氨酸。