[发明专利]结合测定

权利要求书

1.一种用于测定包含淋巴细胞活化基因-3(LAG-3)蛋白或其片段、衍生物或类似物的制剂的MHC II类结合活性的方法，其中所述方法包括使用生物层干涉术(BLI)测定所述LAG-3蛋白、片段、衍生物或类似物与MHC II类分子的结合。

2.根据权利要求1所述的方法，其包括测定所述LAG-3蛋白、片段、衍生物或类似物与MHC II类表达细胞上存在的MHC II类分子的结合。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述LAG-3蛋白、片段、衍生物或类似物被固定化到BLI探针的试剂层，并且所述MHC II类表达细胞是在溶液中的。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述MHC II类表达细胞可以至少1E6/mL，优选至少4E6/mL或8E6/mL的密度存在。

5.根据权利要求3或4所述的方法，其中所述试剂层已用封闭试剂预处理以最小化所述MHC II类表达细胞与所述试剂层的非特异性结合。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述封闭试剂包括白蛋白，优选牛血清白蛋白(BSA)。

7.根据权利要求2至6中任一项所述的方法，其中所述MHC II类表达细胞是Raji细胞。

8.根据权利要求2至7中任一项所述的方法，其中所述MHC II类表达细胞是从冷冻储备溶液获得的解冻的、即用型细胞。

9.根据前述任一项权利要求所述的方法，其包括针对多种不同浓度的所述LAG-3蛋白、片段、衍生物或类似物，测定所述LAG-3蛋白、片段、衍生物或类似物与所述MHC II类分子的结合速率，以及产生针对所述结合速率的剂量-应答曲线。

10.根据前述任一项权利要求所述的方法，其还包括在与用于测定所述制剂的所述LAG-3蛋白、片段、衍生物或类似物的结合相同的条件下，通过使用BLI测定参比样品的所述LAG-3蛋白、片段、衍生物或类似物与MHC II类分子的结合来测定LAG-3蛋白或其片段、衍生物或类似物的所述参比样品的MHC II类结合活性，并且将针对所述参比样品测定的所述MHC II类结合活性与针对所述制剂测定的所述MHC II类结合活性进行比较。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述参比样品的所述MHC II类结合活性被设定为100％。

12.根据权利要求10或11所述的方法，其中所述参比样品包含LAG-3蛋白或其片段、衍生物或类似物，所述LAG-3蛋白或其片段、衍生物或类似物已进行处理以降低其MHC II类结合活性。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述参比样品的所述LAG-3蛋白、片段、衍生物或类似物已去糖基化、在37℃下储存至少12天、氧化、通过酸或碱处理变性，或暴露于光至少5天。

14.一种用于测定LAG-3蛋白或其片段、衍生物或类似物的MHC II类结合活性的BLI探针，所述BLI探针包括所述LAG-3蛋白或其片段、衍生物或类似物所固定化到的试剂层。

15.根据权利要求14所述的探针，其中所述试剂层已用封闭试剂预处理以最小化所述MHC II类表达细胞与所述试剂层的非特异性结合。

16.根据权利要求15所述的探针，其中所述封闭试剂包括白蛋白，优选BSA。