[发明专利]环介导等温扩增技术检测三种泌尿生殖道支原体的方法

权利要求书

1.解脲脲原体(Ureaplasma Urealyticum, UU)、生殖支原体(Mycoplasma Genitalium, MG) 和人型支原体(Mycoplasma Hominis, MH) 的LAMP检测靶点：用于对人类泌尿生殖道感染常见支原体进行LAMP检测的专用引物，即根据UU（NCBI GenBank Accession M36190.1）、MG（NCBI GenBank NR_074611.1）和MH（NCBI GenBank AJ243692.1）的特异性保守靶序列设计的，用以定性检测待测样品中的UU、MG和MH。

2.根据权利要求1所述的LAMP检测靶点，设计了UU、MG和MH的专用引物，详见说明书中表1、2和3，每套引物包含4条寡核苷酸序列，即F3、B3、FIP和BIP。

3.一种UU、MG和MH的LAMP检测方法，主要包括以下步骤：反应过程以待测物的基因组DNA为模板，在权利要求1或2所述专用引物的引导下进行LAMP扩增；反应结束后肉眼观察产物是否浑浊；与阴性对照相比，明显出现浑浊物的样本为阳性，阳性产物经离心后在试管底部出现沉淀物若无浑浊现象，则为阴性标本；亦可在反应液中添加1µl的SYBR GREEN（1:100稀释）， 在紫外光激发下观察结果，产物呈荧光绿色表示该样品存在支原体感染，颜色无变化表示待测样品中不存在支原体感染；或利用浊度仪监测反应中的浊度变化来判断结果，浊度上升表示待测样品中存在UU、MG或MH（阳性），浊度无变化表示待测样品为阴性。

4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于：所述步骤[1]中的待测样品包括粗提DNA（如煮沸法）、某商品化试剂盒提取的DNA或纯化DNA；根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于25 µl LAMP反应体系包括：待测物的基因组DNA 2 µl，20 mM Tris•HCl (pH 8.8)，10 mM KCl，8 mM MgSO4，10 mM (NH4)2SO4，0.1% Tween20，0.8 M 甜菜碱（betaine），1.4 mM dNTP each，8U Bst DNA polymerase；引物用量为：5 pmol F3和B3，40 pmol FIP和BIP；UU、MG和MH的专用引物详见说明书中表1、2和3所示。

5.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于LAMP扩增条件为：置55~67℃恒温30~90min，优选为63℃恒温60 min。

6.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于SYBR GREEN（1:100稀释)的添加量为1µl。

7.一种UU、MG和MH的LAMP检测试剂盒，包含有权利要求1或2所述的专用引物。